Periodic acid-Schiff (PAS) je další běžně používané speciální barvivo v histologické laboratoři.
Co barví PAS?
(1) Polysacharidy: Tato technika se běžně používá k identifikaci polysacharidů – tyto makromolekuly se skládají z monosacharidových jednotek spojených kovalentními vazbami. Hlavním polysacharidem identifikovaným pomocí histologického barvení v řezech lidských a zvířecích tkání je glykogen. Ten je přítomen v mnoha tkáních, včetně kosterního svalu, srdečního svalu, jater a ledvin.
(2) Neutrální hlenové látky: Běžně se také používá k barvení a identifikaci neutrálních hlenových látek. Ty mohou zahrnovat glykoproteiny, glykolipidy a neutrální muciny, které jsou produkovány epiteliálními buňkami v různých orgánech.
(3) Tkáňové bazální membrány: Tyto PAS-pozitivní tenké vrstvy retikulární pojivové tkáně ukotvují a podpírají epitel a endotel k podkladové pojivové tkáni.
(4) Houbové organismy: Buněčné stěny některých houbových organismů obsahují velké množství sacharidů a rovněž se barví PAS pozitivně. To však funguje pouze u živých hub.
Obecné principy barvení
Reaktivita techniky PAS je založena na struktuře monosacharidových jednotek.
První reakce v barvení zahrnuje periodickou kyselinu, která působí jako oxidační činidlo a oxiduje vazby mezi dvěma sousedními hydroxylovými skupinami. Tím vznikají Schiffovy reaktivní aldehydové skupiny.
Při druhé reakci reaguje řez tkání se Schiffovým činidlem. To se skládá ze směsi zásaditého fuchsinu, kyseliny chlorovodíkové a metabisulfitanu sodného. Základní fuchsin ve směsi reaguje s nově vytvořenými aldehydovými skupinami v tkáni za vzniku jasně purpurové barvy.
Při opláchnutí řezu ve vodě pak vázané molekuly fuchsinu v tkáni vytvářejí jasně purpurovou barvu. Intenzita barvy je úměrná koncentraci hydroxylových skupin původně přítomných v monosacharidových jednotkách.
Haematoxylin se pak obvykle používá jako protibarvení k vizualizaci dalších tkáňových prvků. Při použití PAS k průkazu houbových organismů se však dává přednost světle zelenému protibarvení.
Diastázové (alfa-amylázové) štěpení může být rovněž použito jako pomoc při diagnostice glykogenových střádavých onemocnění. Diastáza hydrolyzuje škrob, glykogen a rozkladné produkty pocházející z těchto tkáňových polysacharidů. Ve srovnání s preparátem tkáně obsahující glykogen nebude na preparátu extrahovaném diastázou viditelné barvení PAS.
| Histologický znak | Barva s PAS barvením |
| Glykogen, bazální membrány, hlenové látky, houbové organismy | magenta |
| jádra | modrá (s hematoxylinovým protibarvením) |
| ostatní tkáňové prvky | zelená (se světle zeleným protibarvením) |
Kdo používá PAS barvení?
Toto barvení se široce používá pro diagnostické i výzkumné účely. Například vědci, kteří studují onemocnění zásob glykogenu nebo onemocnění bazální membrány, mohou rutinně zkoumat řezy tkání obarvené PAS, aby vyhodnotili tyto příslušné prvky v zájmových tkáních.
V diagnostických laboratořích patologové často používají toto barvení, aby pomohli odpovědět na otázky, které mohou vyvstat po vyšetření rutinních řezů obarvených hematoxylinem a eozinem. Zejména může být použito jako pomoc při diagnostice:
- Onemocnění ukládání glykogenu: Jedná se o stavy, při nichž se v játrech, svalech nebo ledvinách ukládá nadměrné množství glykogenu. PAS se v klinice často rutinně používá k průkazu nahromadění glykogenu v biopsiích těchto tkání.
- Nádory: Glykogenová zrna mohou být přítomna také v některých nádorech, včetně některých nádorů vznikajících ve tkáních, jako je slinivka břišní, plíce a močový měchýř.
- Houbová infekce: PAS lze použít k vizualizaci některých houbových organismů v řezech tkání.
- Membrány močového měchýře: Protože PAS lze použít ke zvýraznění bazálních membrán tkání, lze ji použít k identifikaci poruch, při nichž dochází k oslabení nebo nesprávné funkci bazálních membrán – například v případě některých glomerulárních onemocnění ledvin.
K čemu se PAS ve vaší laboratoři nejčastěji používá?
Pomohlo vám to? Pak se prosím podělte se svou sítí.
.