Promotory/Katalog/T7

Popis

Promotory T7 mohou produkovat vysokou úroveň transkripce v E. coli, pokud je přítomen T7 RNAP. Druhou výhodou promotorů T7 je, že nejsou rozpoznávány RNAP E. coli, díky čemuž jsou promotory T7 schopny nezávislé regulace na promotorech E. coli. Protože aktivní silný promotor T7 může zcela zastavit růst E. coli kvůli vysoké spotřebě zdrojů (např. nukleotidů) T7 RNAP, je obvykle nutné regulovat buď hladinu T7 RNAP, nebo T7 promotoru, nebo obou. Rodina promotorů T7 proto obsahuje jak konstitutivní promotory, tak negativně regulované promotory, které lze vypnout pomocí represorového proteinu. Nejběžnějším buněčným kmenem pro použití promotorového systému T7 je BL21(DE3), což je kmen E. coli B, který obsahuje lyzogen λ s indukovatelným genem T7 RNAP na chromozomu. Je však možné upravit mnoho dalších kmenů E. coli tak, aby podmíněně exprimovaly T7 RNAP.

Získání sbírky promotorů T7

Sekvence promotorů T7 naleznete v následující tabulce. Pro získání fyzické DNA doporučujeme dva přístupy –
Syntézou de novo: Vzhledem k tomu, že promotory jsou relativně krátké sekvence, lze je objednat jako dvě jednořetězcová překrývající se oliga, která se žíhají a prodlužují, aby se vytvořily plné promotory. Viz tento protokol OpenWetWare o tom, jak konstruovat části pomocí žíhání a prodlužování oliga. Alternativně lze promotory objednat jako krátké geny od společnosti Geneart.

Prostřednictvím distribuce Registry:

Návrh &Konstrukce

Promotory T7 ve sbírce navrhlo a zkonstruovalo několik různých skupin. Existuje však pouze T7 RNAP, a tedy pouze jeden druh promotoru T7. Konsensuální sekvenci pro promotory T7 lze odvodit ze sekvenčního loga pro promotory T7 uvedeného vpravo.

Sbírka promotorů T7

.

.

.

.

.

.

Více…

Název	Popis	Sekvence promotoru	Pozitivní Regulátory	Negativní Regulátory	Délka	Doklad	Stav
BBa_I712074	T7 promotor (silný promotor z bakteriofága T7)	. . . agggaatacaagctacttgttctttttgca			46	1938	Na skladě
BBa_I719005	Promotor T7	taatacgactcactatagggaga			23	7912	Na skladě
BBa_J34814	T7 Promotor	gaatttaatacgactcactatagggaga			28	1190	Není skladem
BBa_J64997	T7 konsensus -.10 a zbytek	taatacgactcactatagg			19	10154	Je to složité
BBa_K113010	překrývající se promotor T7	. . gagtcgtattaatacgactcactatagggg			40	1553	Je to složité
BBa_K113011	více se překrývající promotor T7	. . agtgagtcgtacgactcactatagggg			37	1601	Je to složité
BBa_K113012	slabší překryv promotoru T7	. gagtcgtattaatacgactctatagggg			40	1630	Je to složité
BBa_K1614000	T7 promotor pro. exprese funkční RNA	taatacgactcactatag			18	5219	Na skladě
BBa_K3511008	C62-T7 promotor	taatacgactcacaatcgcggag			23
BBa_K3633015	T7 promotor	taatacgactcactatagg			19		Je to složité
BBa_K525998	Promotor T7 a RBS	. . . atacgactcactatagggaaagaggagaaa			32	3036	Na skladě
BBa_R0085	Souhlasná promotorová sekvence T7	taatacgactcactatagggaga			23	2072	Na skladě
BBa_R0180	T7 RNAP promotor	ttatacgactcactatagggaga			23	1654	Není skladem
BBa_R0181	T7 RNAP promotor	gaatacgactcactatagggaga			23	1651	Není skladem
BBa_R0182	T7 RNAP promotor	taatacgtctcactatagggaga			23	1653	Není skladem. na skladě
BBa_R0183	T7 RNAP promotor	tcatacgactcactatagggaga			23	1653	Není skladem
BBa_R0184	T7 promotor (lacI represibilní)	. . ataggggaattgtgagcggataacaattcc			44	1176	Není skladem
BBa_R0185	T7 promotor (lacI repressible)	. . ataggggaattgtgagcggataacaattcc			44	1888	Není skladem
BBa_R0186	T7 promotor (lacI repressible)	. ataggggaattgtgagcggataacaattcc			44	1885	Není skladem
BBa_R0187	T7 promotor (lacI repressible)	. . ataggggaattgtgagcggataacaattcc			44	1885	Není skladem
BBa_Z0251	T7 silný promotor	. . taatacgactcactatagggagaccacaac			35	1887	Není skladem
BBa_Z0252	T7 slabá vazba a procesivita	. taattgaactcactaaagggagaccacagc			35	1667	Není skladem
BBa_Z0253	T7 slabě vázaný promotor	. . cgaagtaatacgactcactattagggaaga			35	1400	Není skladem

.