Description
A T7 promóterek magas szintű transzkripciót képesek produkálni E. coli-ban, ha a T7 RNAP jelen van. A T7 promóterek második előnye, hogy az E. coli RNAP nem ismeri fel őket, így a T7 promóterek képesek az E. coli promóterektől független szabályozásra. Mivel egy aktív, erős T7 promóter teljesen leállíthatja az E. coli növekedését a T7 RNAP nagymértékű erőforrás-fogyasztása (pl. nukleotidok) miatt, általában vagy a T7 RNAP, vagy a T7 promóter, vagy mindkettő szintjének szabályozására van szükség. Így a T7 promótercsalád tartalmaz konstitutív promótereket és negatívan szabályozott promótereket is, amelyek egy represszor fehérjével kikapcsolhatók. A T7 promóter rendszerrel leggyakrabban használt sejttörzs a BL21(DE3), amely egy E. coli B törzs, amely egy λ lizogént tartalmaz egy indukálható T7 RNAP génnel a kromoszómán. Azonban számos más E. coli törzset is lehet úgy alakítani, hogy feltételesen expresszálja a T7 RNAP-ot.
A T7 promótergyűjtemény megszerzése
A T7 promóterek szekvenciái az alábbi táblázatban találhatók. A fizikai DNS megszerzéséhez kétféle megközelítést ajánlunk –
Via de novo szintézis: Mivel a promóterek viszonylag rövid szekvenciák, megrendelhetők két egyszálú, egymást átfedő oligót lágyítva és meghosszabbítva a teljes promóterek megépítéséhez. Lásd ezt az OpenWetWare protokollt a részek oligók lágyításával és hosszabbításával történő felépítéséről. Alternatívaként a promóterek rövid génekként is megrendelhetők egy olyan cégtől, mint a Geneart.
A Registry terjesztésén keresztül: A promóterek egy része elérhető a jelenlegi regiszter terjesztésében, lásd az alábbi táblázat elérhetőségi oszlopát.
Tervezés & Konstrukció
A T7 bakteriofág genomból származó erős promóterek szekvencia logója.
A gyűjteményben található T7 promótereket több különböző csoport tervezte és konstruálta. Azonban csak T7 RNAP és így csak egyféle T7 promóter létezik. A T7 promóterek konszenzus szekvenciájára a jobb oldalon látható T7 promóterek szekvencia logójából lehet következtetni.
T7 promóter gyűjtemény
| Név | Megnevezés | Promóter szekvencia | Pozitív Regulátorok |
Negatív Regulátorok |
Hossz | Doc | Status | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| BBa_I712074 | T7 promóter (erős promóter a T7 bakteriofágból) | . . . agggaatacaagctacttgttctttttttgca | 46 | 1938 | Készleten | ||||
| BBa_I719005 | T7 Promoter | taatacgactcactatagggaga | 23 | 7912 | Készleten | ||||
| BBa_J34814 | T7 Promoter | gaatttaatacgactcactatatagggaga | 28 | 1190 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_J64997 | T7 konszenzus -10 és a többi | taatacgactcactatagg | 19 | 10154 | Ez bonyolult | ||||
| BBa_K113010 | átfedő T7 promóter | . . gagtcgtattaatacgactcactatagggg | 40 | 1553 | Ez bonyolult | ||||
| BBa_K113011 | több átfedő T7 promóter | . . agtgagtcgtactacgactcactatagggg | 37 | 1601 | Ez bonyolult | ||||
| BBa_K113012 | gyengébb átfedő T7 promoter | . . . gagtcgtattaatacgactctctctatagggg | 40 | 1630 | Ez bonyolult | ||||
| BBa_K1614000 | T7 promóter számára. funkcionális RNS kifejezése | taatacgactcactatag | 18 | 5219 | Készleten | ||||
| BBa_K3511008 | C62-T7 promóter | taatacgactcacaatcgcggag | 23 | ||||||
| BBa_K3633015 | T7 promóter | . | taatacgactcactatagg | 19 | Ez bonyolult | ||||
| BBa_K525998 | Promoter T7 és RBS | . . . atacgactcactatagggaaagaggaggagaaa | 32 | 3036 | Készleten | ||||
| BBa_R0085 | T7 Consensus Promoter Sequence | taatacgactcactatagggaga | 23 | 2072 | Készleten | ||||
| BBa_R0180 | T7 RNAP promóter | ttatacgactcactatatagggaga | 23 | 1654 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_R0181 | T7 RNAP promoter | gaatacgactcactatagggaga | 23 | 1651 | Nem raktáron | ||||
| BBa_R0182 | T7 RNAP promóter | taatacgtctcactatagggaga | 23 | 1653 | Nincs. raktáron | ||||
| BBa_R0183 | T7 RNAP promoter | tcatacgactcactatagggaga | 23 | 1653 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_R0184 | T7 promóter (lacI represszibilis) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1176 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_R0185 | T7 promóter (lacI represszibilis) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1888 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_R0186 | T7 promóter (lacI represszibilis) | . . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_R0187 | T7 promóter (lacI elnyomható) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_Z0251 | T7 erős promóter | . . taatacgactcactatatagggagaccacaac | 35 | 1887 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_Z0252 | T7 gyenge kötődés és feldolgozhatóság | . . . taattgaactcactaaagggagaccacagc | 35 | 1667 | Nincs raktáron | ||||
| BBa_Z0253 | T7 gyenge kötődésű promóter | . . cgaagtaatacgactcactattagggaaga | 35 | 1400 | Nincs raktáron |