Kwas okresowy-Schiffa (PAS) jest kolejnym powszechnie używanym specjalnym barwnikiem w laboratorium histologicznym.
Co barwi PAS?
(1) Polisacharydy: Technika ta jest powszechnie stosowana do identyfikacji polisacharydów – te makrocząsteczki składają się z jednostek monosacharydowych połączonych wiązaniami kowalencyjnymi. Głównym polisacharydem identyfikowanym poprzez barwienie histologiczne w ludzkich i zwierzęcych wycinkach tkanek jest glikogen. Jest on obecny w wielu tkankach, w tym w mięśniach szkieletowych, mięśniu sercowym, wątrobie i nerkach.
(2) Neutralne substancje śluzowe: Jest on również powszechnie stosowany do barwienia i identyfikacji neutralnych substancji śluzu. Mogą one obejmować glikoproteiny, glikolipidy i neutralne mucyny, które są wytwarzane przez komórki nabłonkowe w różnych narządach.
(3) Błony podstawne tkanek: Te PAS-dodatnie cienkie warstwy siateczkowatej tkanki łącznej zakotwiczają i podtrzymują nabłonek i śródbłonek do leżącej pod nim tkanki łącznej.
(4) Organizmy grzybicze: Ściany komórkowe niektórych organizmów grzybowych zawierają wysoki poziom węglowodanów, a także barwią się PAS-pozytywnie. Jednakże działa to tylko na żywych grzybach.
Ogólne zasady barwienia
Reaktywność techniki PAS jest oparta na strukturze jednostek monosacharydowych.
Pierwsza reakcja w barwieniu obejmuje kwas okresowy działający jako utleniacz w celu utlenienia wiązań węgiel-węgiel pomiędzy dwoma sąsiadującymi grupami hydroksylowymi. W ten sposób powstają reaktywne grupy aldehydowe Schiffa.
W drugiej reakcji, fragment tkanki reaguje z odczynnikiem Schiffa. Składa się on z mieszaniny fuksyny zasadowej, kwasu chlorowodorowego i metabisiarczynu sodu. Zasadowa fuksyna w mieszaninie reaguje z nowo utworzonymi grupami aldehydowymi w tkance, wytwarzając jasny kolor magenta.
Na koniec, kiedy sekcja jest płukana w wodzie, związane cząsteczki fuksyny w tkance wytwarzają jasny kolor magenta. Intensywność tego koloru jest proporcjonalna do stężenia grup hydroksylowych pierwotnie obecnych w jednostkach monosacharydowych.
Haematoksylina jest następnie zwykle używana jako przeciwbarwnik do uwidocznienia innych elementów tkanki. Jednakże, gdy PAS jest używany do wykazania organizmów grzybiczych, preferowany jest jasnozielony przeciwbarwnik.
Trawienie diastazą (alfa-amylazą) może być również stosowane do wspomagania diagnostyki chorób spichrzeniowych glikogenu. Diastaza hydrolizuje skrobię, glikogen i produkty rozpadu pochodzące z tych polisacharydów tkankowych. W porównaniu ze szkiełkiem tkanki zawierającej glikogen, szkiełko po ekstrakcji diastazą nie będzie miało widocznego zabarwienia PAS.
| Cecha histologiczna | Barwa z PAS Stain |
| Glikogen, błony podstawne, substancje śluzowe, organizmy grzybowe | Magenta |
| Jądra | Niebieski (z przeciwbarwieniem hematoksyliną) |
| Inne elementy tkanki | Zielony (z przeciwbarwieniem jasnozielonym) |
Kto używa barwnika PAS?
Barwa ta jest szeroko stosowana zarówno do celów diagnostycznych jak i badawczych. Na przykład, naukowcy badający choroby związane z magazynowaniem glikogenu lub choroby błony podstawnej mogą rutynowo badać sekcje tkanek barwione PAS, aby ocenić te odpowiednie elementy w tkankach będących przedmiotem zainteresowania.
W laboratoriach diagnostycznych patolodzy często używają tej barwy, aby pomóc odpowiedzieć na pytania, które mogą pojawić się po zbadaniu rutynowych sekcji barwionych hematoksyliną i eozyną. W szczególności, może być używany do pomocy w diagnozowaniu:
- Chorób spichrzeniowych glikogenu: Są to stany, w których nadmierne ilości glikogenu są magazynowane w wątrobie, mięśniach lub nerkach. PAS jest często rutynowo stosowany w klinice w celu wykazania nagromadzenia glikogenu w biopsjach tych tkanek.
- Twory: Granulki glikogenu mogą być również obecne w niektórych guzach, w tym niektórych z tych, które powstają w tkankach takich jak trzustka, płuco i pęcherz moczowy.
- Infekcja grzybicza: PAS może być stosowany do wizualizacji niektórych organizmów grzybiczych w przekrojach tkanek.
- Błony podstawne: Ponieważ PAS może być używany do uwidocznienia błon podstawnych tkanek, może być używany do identyfikacji zaburzeń, w których występuje osłabienie lub nieprawidłowe funkcjonowanie błon podstawnych – tak jak w przypadku niektórych chorób kłębuszków nerkowych.
Do czego PAS jest najczęściej używany w Twoim laboratorium?
Czy to Ci pomogło? Podziel się nim z innymi użytkownikami.
.