Periodic acid-Schiff (PAS) er en anden almindeligt anvendt specialfarve i histologilaboratoriet.
Hvad farves med PAS?
(1) Polysaccharider: Teknikken bruges almindeligvis til at identificere polysaccharider – disse makromolekyler er sammensat af monosaccharidenheder, der er forbundet med kovalente bindinger. Det vigtigste polysaccharid, der identificeres ved hjælp af histologisk farvning i menneskelige og animalske vævsafsnit, er glykogen. Dette findes i mange væv, herunder skeletmuskel, hjertemuskel, lever og nyre.
(2) Neutrale slimsubstanser: Det anvendes også almindeligvis til farvning og identifikation af neutrale slimsubstanser. Disse kan omfatte glykoproteiner, glykolipider og neutrale muciner, som produceres af epitelceller i forskellige organer.
(3) Vævskældermembraner: Disse PAS-positive tynde lag af retikulært bindevæv forankrer og støtter epitel og endothel til det underliggende bindevæv.
(4) Svampeorganismer: Cellevæggene i nogle svampeorganismer indeholder et højt indhold af kulhydrat og har også PAS-positive farvestoffer. Dette virker dog kun på levende svampe.
Farvens generelle principper
PAS-teknikkens reaktivitet er baseret på strukturen af monosakkaridenhederne.
Den første reaktion i farven indebærer, at periodisk syre virker som et oxidationsmiddel, der oxiderer kulstof-kulstofbindingerne mellem to tilstødende hydroxylgrupper. Herved dannes Schiff-reaktive aldehydgrupper.
I den anden reaktion reagerer vævsafsnittet med Schiff-reagenset. Dette består af en blanding af basisk fuchsin, saltsyre og natriummetabisulfit. Den basiske fuchsin i blandingen reagerer med nyligt dannede aldehydgrupper i vævet og frembringer en lys magenta farve.
Til sidst, når snittet skylles i vand, frembringer de bundne fuchsinmolekyler i vævet derefter en lys magenta farve. Intensiteten af farven er proportional med koncentrationen af de hydroxylgrupper, der oprindeligt var til stede i monosaccharidenhederne.
Haematoxylin anvendes derefter typisk som modfarve til at visualisere andre vævselementer. Når PAS anvendes til påvisning af svampeorganismer, foretrækkes dog en lysegrøn modfarve.
Diastase (alfa-amylase)-fordøjelse kan også anvendes som hjælp til diagnosticering af glykogenoplagringssygdomme. Diastase hydrolyserer stivelse, glykogen og nedbrydningsprodukter, der stammer fra disse vævspolysaccharider. Sammenlignet med et objektglas med væv, der indeholder glykogen, vil et objektglas med diastaseekstraktion ikke have nogen synlig PAS-farve.
| Histologisk træk | Farve med PAS-farve |
| Glykogen, kældermembraner, slimsubstanser, svampeorganismer | Magenta |
| Nuclei | Blå (med hæmatoxylin modfarve) |
| Andre vævselementer | Grøn (med lysegrøn modfarve) |
Hvem bruger PAS-farve?
Denne farvning anvendes i vid udstrækning til både diagnostiske og forskningsmæssige formål. For eksempel kan forskere, der studerer glykogenlagringssygdomme eller sygdomme i basalmembranen, rutinemæssigt undersøge PAS-farvede vævsafsnit for at vurdere disse respektive elementer i væv af interesse.
I diagnostiske laboratorier bruger patologer ofte denne farvning som hjælp til at besvare spørgsmål, der kan opstå efter undersøgelse af rutinemæssige hæmatoxylin- og eosinfarvede afsnit. Den kan især bruges til at hjælpe med at diagnosticere:
- Glykogenlagringssygdomme: Disse er tilstande, hvor der oplagres for store mængder glykogen i leveren, musklerne eller nyrerne. PAS anvendes ofte rutinemæssigt i klinikken til at påvise glykogenophobning i biopsier af disse væv.
- Tumorer: Glykogengranula kan også være til stede i nogle tumorer, herunder nogle af dem, der opstår i væv som bugspytkirtel, lunge og blære.
- Svampeinfektion: PAS kan bruges til at visualisere nogle svampeorganismer i vævssnit.
- Basismembraner: Da PAS kan bruges til at fremhæve basalmembranerne i væv, kan det bruges til at identificere sygdomme, hvor basalmembranerne er svage eller fungerer dårligt – som f.eks. ved visse glomerulære sygdomme i nyrerne.
Hvad bruges PAS oftest til i dit laboratorium?
Har dette hjulpet dig? Så del den venligst med dit netværk.