Beskrivelse
T7-promotorer kan producere høje niveauer af transkription i E. coli, når T7 RNAP er til stede. Den anden fordel ved T7-promotorer er, at de ikke genkendes af E. coli RNAP, hvilket gør T7-promotorer i stand til at blive reguleret uafhængigt af E. coli-promotorer. Da en aktiv stærk T7-promotor kan standse E. coli’s vækst fuldstændigt på grund af T7 RNAP’s store ressourceforbrug (f.eks. nukleotider), er det typisk nødvendigt at regulere niveauerne af enten T7 RNAP eller T7-promotoren eller begge dele. T7-promotorfamilien indeholder således både konstitutive promotorer og negativt regulerede promotorer, som kan slukkes af et repressorprotein. Den mest almindelige cellestamme til brug med et T7-promotorsystem er BL21(DE3), som er en E. coli B-stamme, der indeholder en λ-lysogen med et inducerbart T7 RNAP-gen på kromosomet. Det er imidlertid muligt at manipulere mange andre E. coli-stammer til betinget at udtrykke T7 RNAP.
Hentning af T7-promotorsamlingen
Sekvenserne af T7-promotorer kan findes i nedenstående tabel. For at opnå det fysiske DNA anbefaler vi to fremgangsmåder –
Via de novo-syntese: Da promotorerne er relativt korte sekvenser, kan de bestilles som to enkeltstrengede overlappende oligo’er, der annealeres og forlænges for at konstruere de fulde promotorer. Se denne OpenWetWare-protokol om, hvordan man konstruerer dele via oligo annealing og forlængelse. Alternativt kan promotorerne bestilles som korte gener fra et firma som Geneart.
Via Registry distribution: Nogle af promoterne er tilgængelige i den aktuelle registerdistribution, se kolonnen tilgængelighed i tabellen nedenfor.
Design & Konstruktion
Sekvenslogoet for de stærke promotere fra bakteriofagen T7-genomet.
T7-promotorerne i samlingen er designet og konstrueret af flere forskellige grupper. Der findes dog kun T7 RNAP og dermed kun én slags T7-promotor. Konsensussekvensen for T7-promotorer kan udledes af sekvenslogoet for T7-promotorer vist til højre.
T7-promotorsamling
| Navn | Beskrivelse | Promotorsekvens | Positive Regulatorer |
Negative Regulatorer |
Doc | Status | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| BBa_I712074 | T7-promotor (stærk promotor fra T7-bakteriofagen) | . . . agggaatacaagctacttacttgttttctttttttgca | 46 | 1938 | På lager | |||
| BBa_I719005 | T7 Promotor | taatacacgactcactcactatagggaga | 23 | 7912 | På lager | |||
| BBa_J34814 | T7 Promotor | gaatttaatacacgactcactatatagggaga | gaatttaatacgactatagggaga | 28 | 1190 | ikke på lager | ||
| BBa_J64997 | T7 konsensus -10 og resten | taatacgactcactatagg | 19 | 10154 | Det er kompliceret | |||
| BBa_K113010 | overlappende T7-promotor | . . gagtcgtattaatatacgactcactatagggg | 40 | 1553 | Det er kompliceret | |||
| BBa_K113011 | mere overlappende T7-promotor | . . agtgagtcgtactactacgactcactatagagggg | 37 | 1601 | Det er kompliceret | |||
| BBa_K113012 | svagere overlappende T7-promotor | . . gagtcgtcgtattaatacacgactctctctatagggg | 40 | 1630 | Det er kompliceret | |||
| BBa_K1614000 | T7-promotor for ekspression af funktionelt RNA | taatacgactcactatag | 18 | 5219 | På lager | |||
| BBa_K3511008 | C62-T7-promotor | taatacgactcacaatcgcggag | 23 | |||||
| BBa_K3633015 | T7-promotor | taatacgactcactatagg | 19 | Det er kompliceret | ||||
| BBa_K525998 | Promoter T7 og RBS | . . . atacgactcactataggaggaggagaggagaaa | 32 | 3036 | På lager | |||
| BBa_R0085 | T7 Consensus Promoter Sequence | taatacgactcactatagggaga | 23 | 2072 | På lager | |||
| BBa_R0180 | T7 RNAP-promotor | ttatatacacgactcactatagagggaga | 23 | 1654 | ikke på lager | |||
| BBa_R0181 | T7 RNAP-promotor | gaatacgactgactcactatatagggaga | 23 | 1651 | Ikke på lager | |||
| BBa_R0182 | T7 RNAP-promotor | taatacgtctctcactatatagggaga | 23 | 1653 | Ikke på lager på lager | |||
| BBa_R0183 | T7 RNAP-promotor | tcatacgactcactcactatagagggaga | 23 | 1653 | ikke på lager | |||
| BBa_R0184 | T7-promotor (lacI undertrykkelig) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1176 | Ikke på lager | |||
| BBa_R0185 | T7-promotor (lacI-repressible) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1888 | Ikke på lager | |||
| BBa_R0186 | T7-promotor (lacI-repressible) | . . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | ikke på lager | |||
| BBa_R0187 | T7-promotor (lacI-repressible) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Ikke på lager | |||
| BBa_Z0251 | T7 stærk promotor | . . taatacgactcactcactatagggagaccacaac | 35 | 1887 | Ikke på lager | |||
| BBa_Z0252 | T7 svag binding og processivitet | . . . taattgaactcacactaaagggagaccacagc | 35 | 1667 | ikke på lager | |||
| BBa_Z0253 | T7 svagt bindende promotor | . . cgaagtaatacacgactcactattagggaaga | 35 | 1400 | Indeks på lager |