Periodinen happo-Schiff (PAS) on toinen yleisesti käytetty erikoisvärjäys histologian laboratoriossa.
Mitä PAS värjää?
(1) Polysakkaridit: Tekniikkaa käytetään yleisesti polysakkaridien tunnistamiseen- nämä makromolekyylit koostuvat kovalenttisilla sidoksilla yhdistetyistä monosakkaridiyksiköistä. Tärkein polysakkaridi, joka tunnistetaan histologisella värjäyksellä ihmisen ja eläinten kudosleikkeistä, on glykogeeni. Sitä esiintyy lukuisissa kudoksissa, kuten luurankolihaksessa, sydänlihaksessa, maksassa ja munuaisissa.
(2) Neutraalit lima-aineet: Sitä käytetään yleisesti myös neutraalien lima-aineiden värjäämiseen ja tunnistamiseen. Näitä voivat olla glykoproteiinit, glykolipidit ja neutraalit limakiinit, joita eri elinten epiteelisolut tuottavat.
(3) Kudosten tyvikalvot: Nämä PAS-positiiviset verkkomaisen sidekudoksen ohuet kerrokset ankkuroivat ja tukevat epiteeliä ja endoteelia alla olevaan sidekudokseen.
(4) Sienet: Joidenkin sieni-organismien soluseinät sisältävät runsaasti hiilihydraatteja, ja ne värjäytyvät myös PAS-positiivisiksi. Tämä toimii kuitenkin vain elävissä sienissä.
Värjäyksen yleiset periaatteet
PAS-tekniikan reaktiivisuus perustuu monosakkaridiyksiköiden rakenteeseen.
Värjäyksen ensimmäiseen reaktioon kuuluu, että periodihappo toimii hapettimena hapettaen kahden vierekkäisen hydroksyyliryhmän väliset hiili-hiili-sidokset. Näin syntyy Schiffin reaktiivisia aldehydiryhmiä.
Toisessa reaktiossa kudosleike reagoi Schiffin reagenssin kanssa. Tämä koostuu emäksisen fuksiinin, suolahapon ja natriummetabisulfiitin seoksesta. Seoksen emäksinen fuksiini reagoi kudoksessa hiljattain muodostuneiden aldehydiryhmien kanssa tuottaen kirkkaan magentan värin.
Viimeiseksi, kun leike huuhdellaan vedellä, kudokseen sitoutuneet fuksiinimolekyylit tuottavat tällöin kirkkaan magentan värin. Värin voimakkuus on verrannollinen monosakkaridiyksiköissä alun perin olleiden hydroksyyliryhmien pitoisuuteen.
Haematoksyliiniä käytetään tämän jälkeen tyypillisesti vastavärjäyksenä muiden kudososien visualisoimiseksi. Kun PAS:ia käytetään sieni-organismien osoittamiseen, käytetään kuitenkin mieluummin vaaleanvihreää vastavärjäystä.
Diastaasin (alfa-amylaasin) pilkkomista voidaan käyttää myös apuna glykogeenin varastosairauksien diagnosoinnissa. Diastaasi hydrolysoi tärkkelystä, glykogeeniä ja näistä kudospolysakkarideista peräisin olevia hajoamistuotteita. Glykogeeniä sisältävän kudoksen objektilasiin verrattuna diastaasiuuton objektilasissa ei ole näkyvää PAS-värjäystä.
| Histologinen ominaisuus | Väri PAS-värjäyksellä |
| Glykogeeni, tyvikalvot, lima-aineet, sieni-organismit | Magenta |
| Tumat | Sininen (hematoksyliini-vasta-ainevärjäyksellä) |
| Muut kudoselementit | Vihreä (vaaleanvihreällä vasta-ainevärjäyksellä) |
Kuka PAS-värjäystä käyttää?
Tätä värjäystä käytetään laajalti sekä diagnostisiin että tutkimustarkoituksiin. Esimerkiksi tutkijat, jotka tutkivat glykogeenin varastointisairauksia tai tyvikalvon sairauksia, voivat rutiininomaisesti tutkia PAS-värjättyjä kudosleikkeitä arvioidakseen näitä vastaavia elementtejä kiinnostuksen kohteena olevissa kudoksissa.
Diagnostiikkalaboratorioissa patologit käyttävät tätä värjäystä usein apuna vastatakseen kysymyksiin, jotka voivat nousta esiin rutiininomaisesti hematoksyliini- ja eosiinivärjättyjen leikkausten tutkimisen jälkeen. Erityisesti sitä voidaan käyttää apuna seuraavien sairauksien diagnosoinnissa:
- Glykogeenin varastosairaudet: Nämä ovat sairauksia, joissa maksaan, lihaksiin tai munuaisiin varastoituu liikaa glykogeenia. PAS:ia käytetään usein rutiininomaisesti klinikassa osoittamaan glykogeenin kertyminen näiden kudosten biopsioissa.
- Kasvaimet: Glykogeenirakeita voi esiintyä myös joissakin kasvaimissa, mukaan lukien joissakin niistä, jotka syntyvät esimerkiksi haiman, keuhkojen ja virtsarakon kaltaisissa kudoksissa.
- Sieni-infektio: PAS:ia voidaan käyttää joidenkin sieni-organismien visualisointiin kudosleikkeissä.
- Pohjakalvot: Koska PAS:ia voidaan käyttää kudosten tyvikalvojen korostamiseen, sitä voidaan käyttää sellaisten sairauksien tunnistamiseen, joissa tyvikalvot ovat heikkoja tai ne eivät toimi oikein – kuten eräissä munuaisten glomerulaarisissa sairauksissa.
Mihin PAS:ia käytetään yleisimmin laboratoriossasi?
Onko tästä ollut apua? Jaa sitten verkostollesi.