Promoottorit/Katalogi/T7

Kuvaus

T7-promoottorit voivat saada aikaan suuren transkriptiotason E. coli -bakteerissa, kun T7 RNAP on läsnä. T7-promoottorien toinen etu on se, että E. coli RNAP ei tunnista niitä, jolloin T7-promoottorit kykenevät E. coli-promoottoreista riippumattomaan säätelyyn. Koska aktiivinen vahva T7-promoottori voi pysäyttää E. colin kasvun kokonaan, koska T7 RNAP kuluttaa paljon resursseja (esim. nukleotideja), on tyypillisesti tarpeen säädellä joko T7 RNAP:n tai T7-promoottorin tai molempien tasoja. T7-promoottoriperheeseen kuuluu sekä konstitutiivisia promoottoreita että negatiivisesti säädeltyjä promoottoreita, jotka voidaan kytkeä pois päältä repressoriproteiinilla. Yleisin solukanta, jota käytetään T7-promoottorijärjestelmän kanssa, on BL21(DE3), joka on E. coli B -kanta, joka sisältää λ-lysogeenin, jonka kromosomissa on indusoituva T7 RNAP -geeni. On kuitenkin mahdollista kehittää monia muita E. coli -kantoja ilmentämään ehdollisesti T7 RNAP:tä.

T7-promoottorikokoelman hankkiminen

T7-promoottorien sekvenssit löytyvät alla olevasta taulukosta. Fyysisen DNA:n hankkimiseksi suosittelemme kahta lähestymistapaa –
Via de novo -synteesin kautta: Koska promoottorit ovat suhteellisen lyhyitä sekvenssejä, ne voidaan tilata niin, että kaksi yksijuosteista päällekkäistä oligoa anneenataan ja laajennetaan täydellisten promoottorien rakentamiseksi. Katso tämä OpenWetWare-protokolla siitä, miten osat rakennetaan oligojen hehkuttamisen ja pidentämisen avulla. Vaihtoehtoisesti promoottorit voidaan tilata lyhyinä geeneinä Geneartin kaltaiselta yritykseltä.

Rekisterijakelun kautta: Osa promoottoreista on saatavilla nykyisessä rekisterijakelussa, katso saatavuus-sarake alla olevasta taulukosta.

Suunnittelu & Rakentaminen

Kokoelmaan sisältyviä T7:n promoottoreiden suunnittelun ja rakentamisen ovat suorittaneet useat eri ryhmät. On kuitenkin olemassa vain T7 RNAP ja siten vain yhdenlaisia T7-promoottoreita. T7-promoottoreiden konsensussekvenssi voidaan päätellä oikealla esitetystä T7-promoottoreiden sekvenssilogosta.

T7-promoottorikokoelma

.

Lisää…

Nimi	Kuvaus	Promoottorin sekvenssi	Positiiviset Regulaattorit	Negatiiviset Regulaattorit	Pituus	Doc	Status
BBa_I712074	T7-promoottori (vahva promoottori T7-bakteriofaagista)	. . . agggaatacaagctacttgttctttttttgca			46	1938	In stock
BBa_I719005	T7 promoottori	taatacgactcactatagggaga				23	7912	Varastossa
BBa_J34814	T7 promoottori	gaatttaatacgactcactatagggaga				28	1190	Ei varastossa
BBa_J64997	T7 konsensus -10 ja loput	taatacgactcactatagg				19	10154	Se on monimutkainen
BBa_K113010	päällekkäinen T7-promoottori	. . gagtcgtattaatacgactcactatagggg			40	1553	Se on monimutkaista
BBa_K113011	enemmän päällekkäinen T7-promoottori	. . agtgagtcgtactacgactcactatagggg			37	1601	Se on monimutkaista
BBa_K113012	heikentää päällekkäistä T7 promoottoria	. . . gagtcgtattaatacgactctctatagggg			40	1630	Se on monimutkainen
BBa_K1614000	T7-promoottori varten. funktionaalisen RNA:n ilmentäminen	taatacgactcactatag			18	5219	Varastossa
BBa_K3511008	C62-T7 promoottori	taatacgactcacaatcgcggag			23
BBa_K3633015	T7 promoottori	taatacgactcactatagg			19		Se on monimutkaista
BBa_K525998	Promoottori T7:n ja RBS:n välillä	. . . atacgactcactatagggaaagaggaggagaaa			32	3036	Varastossa
BBa_R0085	T7 Consensus Promoter Sequence	taatacgactcactatagggaga				23	2072	Varastossa
BBa_R0180	T7 RNAP promoottori	ttatacgactcactatatagggaga			23	1654	Ei varastossa
BBa_R0181	T7 RNAP promoottori	gaatacgactcactatagggaga			23	1651	Ei varastossa
BBa_R0182	T7 RNAP promoottori	taatacgtctcactatagggaga			23	1653	Ei ole varastossa. varastossa
BBa_R0183	T7 RNAP promoottori	tcatacgactcactatagggaga					23	1653	Ei varastossa
BBa_R0184	T7 promoottori (lacI repressible)	. . ataggggaattgtgagcggataacaattcc			44	1176	Ei varastossa
BBa_R0185	T7-promoottori (lacI repressible)	. . ataggggaattgtgagcggataacaattcc				44	1888	Ei varastossa
BBa_R0186	T7-promoottori (lacI repressible)	. . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc				44	1885	Ei varastossa
BBa_R0187	T7-promoottori (lacI repressible)	. . ataggggaattgtgagcggataacaattcc			44	1885	Ei varastossa
BBa_Z0251	T7 vahva promoottori	. . taatacgactcactatatagggagaccacaac			35	1887	Ei varastossa
BBa_Z0252		T7 heikko sitoutuminen ja prosessoituvuus	. . . . taattgaactcactaaagggagaccacagc			35	1667	Ei varastossa
BBa_Z0253	T7:n heikko sitoutuminen promoottori	. . cgaagtaatacgactcactattagggaaga			35	1400	Ei varastossa