Description
Les promoteurs T7 peuvent produire des niveaux élevés de transcription dans E. coli lorsque la RNAP T7 est présente. Le deuxième avantage des promoteurs T7 est qu’ils ne sont pas reconnus par la RNAP de E. coli, ce qui rend les promoteurs T7 capables d’une régulation indépendante des promoteurs de E. coli. Étant donné qu’un promoteur T7 fort et actif peut arrêter complètement la croissance de E. coli en raison du niveau élevé de consommation de ressources (par exemple, les nucléotides) par la RNAP T7, il est généralement nécessaire de réguler les niveaux soit de la RNAP T7, soit du promoteur T7, soit des deux. Ainsi, la famille des promoteurs T7 contient à la fois des promoteurs constitutifs et des promoteurs régulés négativement qui peuvent être désactivés par une protéine répresseur. La souche cellulaire la plus courante à utiliser avec un système de promoteur T7 est BL21(DE3), une souche B d’E. coli qui contient un λ lysogène avec un gène T7 RNAP inductible sur le chromosome. Cependant, il est possible d’ingénier de nombreuses autres souches d’E. coli pour exprimer conditionnellement la RNAP T7.
Obtention de la collection de promoteurs T7
Les séquences des promoteurs T7 se trouvent dans le tableau ci-dessous. Pour obtenir l’ADN physique, nous recommandons deux approches –
Via synthèse de novo : Comme les promoteurs sont des séquences relativement courtes, ils peuvent être ordonnés comme deux oligo’s simple brin chevauchant sont annelés et étendus pour construire les promoteurs complets. Voir ce protocole OpenWetWare sur la façon de construire des parties par recuit et extension d’oligo. Alternativement, les promoteurs peuvent être commandés en tant que gènes courts auprès d’une société telle que Geneart.
Via la distribution du registre : Certains des promoteurs sont disponibles dans la distribution actuelle du registre, voir la colonne de disponibilité dans le tableau ci-dessous.
Conception &Construction
Le logo de séquence pour les promoteurs forts du génome du bactériophage T7.
Les promoteurs T7 dans la collection ont été conçus et construits par plusieurs groupes différents. Cependant, il n’existe qu’un seul RNAP T7 et donc un seul type de promoteur T7. La séquence consensus pour les promoteurs T7 peut être déduite du logo de séquence pour les promoteurs T7 montré à droite.
Collection de promoteurs T7
| Nom | Description | Séquence du promoteur | Positif Régulateurs |
Négatif Régulateurs |
Longueur | Doc | Statut |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| BBa_I712074 | Promoteur T7 (promoteur fort du bactériophage T7) | . . . agggaatacaagctactactgttttttgca | 46 | 1938 | En stock | ||
| BBa_I719005 | Promoteur T7 | taatacgactcactatagggaga | 23 | 7912 | En stock | ||
| BBa_J34814 | Promoteur T7 | gaatttaatacgactcactatagggaga | 28 | 1190 | Pas en stock | ||
| BBa_J64997 | T7 consensus -.10 et reste | taatacgactcactatagg | 19 | 10154 | C’est compliqué | ||
| BBa_K113010 | promoteur T7 chevauchant | . . . gagtcgtattaatacgactcactatagggg | 40 | 1553 | C’est compliqué | ||
| BBa_K113011 | plus de chevauchement du promoteur T7 | . . agtgagtcgtactacgactcactatagggg | 37 | 1601 | C’est compliqué | ||
| BBa_K113012 | faible chevauchement du promoteur T7 | . . . gagtcgtattaatacgactctatagggg | 40 | 1630 | C’est compliqué | ||
| BBa_K1614000 | Promoteur T7 pour l’expression d’un ARN fonctionnel | taatacgactcactatag | 18 | 5219 | En stock | ||
| BBa_K3511008 | C62-.Promoteur T7 | taatacgactcacaatcgcggag | 23 | ||||
| BBa_K3633015 | Promoteur T7 | taatacgactcactatagg | 19 | C’est compliqué | |||
| BBa_K525998 | Promoteur T7 et RBS | . . . atacgactcactatagggaaaggagaaa | 32 | 3036 | En stock | ||
| BBa_R0085 | Séquence promoteur consensuelle T7 | taatacgactcactatagggaga | 23 | 2072 | En stock | ||
| BBa_R0180 | Promoteur RNAP T7 | ttatacgactcactatagggaga | 23 | 1654 | Pas en stock | ||
| BBa_R0181 | Promoteur RNAP T7 | gaatacgactcactatagggaga | 23 | 1651 | Pas en stock | ||
| BBa_R0182 | Promoteur de la RNAP T7 | taatacgtctcactatagggaga | 23 | 1653 | Non en stock | ||
| BBa_R0183 | Promoteur RNAP T7 | tcatacgactcactatagggaga | 23 | 1653 | Pas en stock | ||
| BBa_R0184 | Promoteur T7 (répressible lacI) | . . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1176 | Pas en stock | ||
| BBa_R0185 | Promoteur T7 (répressible par lacI) | . . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1888 | Pas en stock | ||
| BBa_R0186 | Promoteur T7 (lacI répressible) | . . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Pas en stock | ||
| BBa_R0187 | Promoteur T7 (lacI répressible) | . . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Pas en stock | ||
| BBa_Z0251 | Promoteur T7 fort | . . . taatacgactcactatagggagaccacaac | 35 | 1887 | Pas en stock | ||
| BBa_Z0252 | T7 faible liaison et processivité | . . . taattgaactcactaaagggagaccacagc | 35 | 1667 | Pas en stock | ||
| BBa_Z0253 | T7 weak binding promoter | . . . cgaagtaatacgactcactattagggaaga | 35 | 1400 | Pas en stock |
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