Promoters/Catalog/T7

解説

T7 RNAPが存在すると大腸菌で高濃度の転写を行うことができるプロモータがあります。 T7プロモーターの第2の利点は、大腸菌RNAPによって認識されないことであり、T7プロモーターは大腸菌プロモーターから独立した制御が可能である。 強力なT7プロモーターが活性化すると、T7 RNAPによる高レベルのリソース消費（例えば、ヌクレオチド）のために大腸菌の成長を完全に停止させることができるので、通常、T7 RNAPまたはT7プロモーターのいずれか、あるいは両方のレベルを制御することが必要である。 このように、T7プロモーターファミリーには、構成的プロモーターと、リプレッサータンパク質によってオフにすることができる負に制御されたプロモーターの両方が含まれています。 T7プロモーターシステムで使用する最も一般的な細胞株はBL21(DE3)で、これは染色体上に誘導性T7 RNAP遺伝子を持つλリゾゲンを含む大腸菌B株である。 しかし、他の多くの大腸菌株を操作して、T7 RNAPを条件付きで発現させることは可能である。

T7プロモーターコレクションの入手

T7プロモーターの配列は下表の通りです。 物理的なDNAを入手するには、以下の2つのアプローチをお勧めします。
de novo合成で入手する。 プロモーターは比較的短い配列であるため、2本の一本鎖のオーバーラップオリゴをアニールして拡張し、完全なプロモーターを構築するように注文することができる。 オリゴのアニーリングと伸長でパーツを構築する方法については、このOpenWetWareプロトコルを参照してください。 また、プロモーターは短い遺伝子として、Geneart社

のような会社に注文することもできます。

設計 & 構築