Lactoferrin: The Bioactive Peptide that Fights Disease

As regular readers of the Life Extension magazine are aware, whey protein appears to function as a natural food against cancer, HIV, overtraining syndrome in athletes and a host of pathologies. W szczególności, wpływ serwatki na poziom glutationu i odporność są dobrze udokumentowane w wielu badaniach na zwierzętach z rosnącą liczbą badań na ludziach potwierdzających wyniki badań na zwierzętach. Serwatka jest jednym z dwóch głównych białek występujących w mleku (drugim jest kazeina). Kiedy mówimy o serwatce, mamy na myśli złożone białko składające się z wielu mniejszych podfrakcji białkowych (peptydów), w tym beta-laktoglobuliny, alfa-laktalbuminy, immunoglobulin (IgG), glikomakropeptydów, albuminy surowicy bydlęcej (BSA) i pomniejszych peptydów, takich jak laktoperoksydazy, lizozym i laktoferyna. Każda z podfrakcji występujących w serwatce ma swoje unikalne właściwości biologiczne. Jeszcze do niedawna oddzielenie tych podfrakcji na dużą skalę było niemożliwe lub nieopłacalne. Nowoczesna technologia filtracji znacznie się poprawiła w ciągu ostatnich kilku lat, co pozwoliło kilku firmom na oddzielenie niektórych wysoce bioaktywnych peptydów z serwatki, takich jak laktoferyna. Wiele z tych podfrakcji znajduje się w mleku krowim w bardzo niewielkich ilościach, zwykle poniżej 1%. Na przykład, laktoferyna stanowi około 0,5% – 1% lub mniej białka serwatkowego pochodzącego z mleka krowiego (podczas gdy mleko ludzkiej matki będzie zawierać do 15% laktoferyny). Laktoferyna wydaje się być frakcją serwatki z udokumentowanymi efektami przeciwwirusowymi, przeciwbakteryjnymi, przeciwnowotworowymi i modulującymi/wzmacniającymi układ odpornościowy. Nie ma wątpliwości, że laktoferyna może stać się naturalnym związkiem z wyboru w leczeniu i zapobieganiu wielu ludzkich dolegliwości. Poniżej znajduje się podsumowanie tego, co laktoferyna może mieć do zaoferowania.

Wspólnota

Znaleziona w ludzkim mleku matki, laktoferyna wydaje się
mieć szeroką gamę zastosowań w systemach biologicznych
i jest uważana za pierwszą linię obrony immunologicznej w
ciałach ludzkich.

A minor fraction of whey, lactoferrin appears to have a wide variety of uses in biological systems and is considered a first line immune defense in the human body. Choć naturalnym składnikiem mleka krów i matek ludzkich, laktoferyna znajduje się w całym organizmie człowieka i występuje we wszystkich wydzielinach, które kąpią błony śluzowe, takie jak ślina, łzy, wydzieliny oskrzelowe i nosowe, żółć wątrobowa, płyny trzustkowe, i jest istotnym czynnikiem w odpowiedzi immunologicznej. Laktoferyna jest skoncentrowana w jamie ustnej, gdzie wchodzi w bezpośredni kontakt z patogenami (tj. wirusami, bakteriami, itp.) i zabija lub w znacznym stopniu tłumi te patogeny poprzez szereg różnych mechanizmów. Nie jest do końca jasne, w jaki sposób laktoferyna spełnia wszystkie swoje funkcje modulujące lub wzmacniające odporność, ale wiadomo, że wzmacnia ona odpowiedź immunologiczną zarówno bezpośrednio, jak i pośrednio (biernie) w odpowiedzi na szeroki zakres wyzwań immunologicznych. Specyficzne receptory dla laktoferyny znajdują się na wielu kluczowych komórkach układu odpornościowego, takich jak limfocyty, monocyty i makrofagi, i wiadomo, że jest ona bezpośrednio zaangażowana w pobudzanie aktywności komórek NK (natural killer). Większość badań wskazuje na to, że laktoferyna jest raczej modulatorem odporności niż prostym środkiem stymulującym odporność.

Opublikowane badania, które zbadały stosowanie laktoferyny jako suplementu i jej wpływ na odporność były dość obiecujące. Badania z wykorzystaniem różnych modeli zwierzęcych (tj. szczurów, owiec, świń i kotów, jak również innych) wykazały, że spożywanie laktoferyny ma bezpośredni wpływ ochronny na regulację i modulację układu odpornościowego.

Na przykład, jedno z badań, które badało odpowiedź immunologiczną na endotoksynę (lipopolisacharyd), o której wiadomo, że powoduje ciężki wstrząs septyczny, wykazało, że podawanie laktoferyny myszom dramatycznie zmniejszyło śmiertelność tej endotoksyny, jednocześnie poprawiając parametry odpowiedzi immunologicznej.1 Inne badanie z udziałem małych świń wykazało, że tylko 17% świń padło po podaniu laktoferyny i wstrzyknięciu endotoksyny escherichia coli, w porównaniu do 74% świń, które padły bez laktoferyny! 2 Może to być ważny wynik, ponieważ wstrząs septyczny jest najczęstszą przyczyną śmierci pacjentów intensywnej terapii i 13. główną przyczyną śmierci w Stanach Zjednoczonych. Dwa badania z udziałem zdrowych ochotników wykazały, że spożycie laktoferyny pochodzącej z mleka krowiego miało pozytywne efekty immunoregulacyjne, które były specyficzne dla danej osoby. To znaczy, w zależności od początkowego profilu systemu immunologicznego każdej osoby, spożycie laktoferyny zwiększało odpowiedź immunologiczną, co doprowadziło badaczy do konkluzji „… dane sugerują, że bydlęca (krowia) laktoferyna może być stosowana w klinice w celu poprawy statusu immunologicznego pacjentów.”3 W podobnym badaniu przeprowadzonym na ludziach z udziałem dziesięciu osób, które przyjmowały laktoferynę, stwierdzono, że „wyniki te sugerują, że podawanie laktoferyny może wpływać na pierwotną aktywację systemu obronnego gospodarza. „4

Laktoferyna wydaje się być szczególnie ważna dla zdrowia i funkcji przewodu jelitowego i stwierdzono, że znacznie zmniejsza ogólnoustrojowe i jelitowe stany zapalne w takich warunkach, jak nieswoiste zapalenie jelit i inne. Zwierzęta poddane działaniu różnych patogenów, o których wiadomo, że powodują zarówno ogólnoustrojowe, jak i jelitowe zapalenie i uszkodzenia, wykazują znacznie większą odporność i zmniejszony stan zapalny, gdy karmione są laktoferyną. Przewód pokarmowy musi być postrzegany jako system ekologiczny, w którym istnieje równowaga pomiędzy dobrą i złą florą bakteryjną (mikro florą). Przerost złych bakterii w przewodzie jelitowym jest znany jako przyczyna szerokiej gamy poważnych problemów, które powodują niezliczone mediatory prozapalne, które mają być uwalniane, powodując zakłócenia w całym organizmie.

Po podaniu dorosłym zwierzętom i niemowlętom ludzkim, laktoferyna wykazała dramatyczny wzrost dobrej mikroflory – takiej jak bifidus – i spadek złych bakterii, takich jak E. coli, paciorkowce, clostridium i inne. Rezultatem była pożądana flora jelitowa, która jak wiadomo jest niezbędna dla optymalnego zdrowia, odporności i odporności na choroby. W obszernym przeglądzie, w którym zbadano rolę laktoferyny w zapaleniu i zdrowiu przewodu jelitowego, stwierdzono: „Możliwość, że laktoferyna ogranicza autodestrukcyjną odpowiedź zapalną, stanowi nową alternatywę dla przyszłego zarządzania ogólnoustrojowym zapaleniem. „5 Niektóre badania sugerują również, że laktoferyna jest w stanie stymulować wzrost komórek jelitowych i może prowadzić do lepszych funkcji trawiennych, oprócz jej zdolności do zwiększania wzrostu „dobrej” mikroflory w jelicie. Nie ma wątpliwości, że oprócz działania immunomodulującego, ten naturalny peptyd pochodzący z serwatki ma potężne właściwości pro-biotyczne.

Efekty antywirusowe

Znaleziono, że laktoferyna zarówno bezpośrednio, jak i pośrednio hamuje kilka wirusów, które wywołują choroby u ludzi. Bezpośrednio hamuje wirusy poprzez wiązanie się z miejscami receptorowymi wirusów, zapobiegając w ten sposób infekowaniu zdrowych komórek przez wirusy. Na przykład, badania in vitro wykazały, że laktoferyna silnie wiąże się z pętlą V3 receptora gp120 wirusa HIV-1 i HIV-2, co powoduje zahamowanie fuzji wirus-komórka i wejście wirusa do komórek.10 Ponadto, laktoferyna pośrednio zabija lub hamuje wirusy poprzez wzmocnienie ogólnoustrojowej odpowiedzi immunologicznej na inwazję wirusową. Interesujące jest to, że u osób zakażonych HIV występuje ogólnoustrojowy niedobór laktoferyny. W jednym z badań, w którym przebadano 22 bezobjawowych i 45 objawowych pacjentów z HIV w porównaniu do 30 zdrowych osób z grupy kontrolnej, stwierdzono, że „poziom laktoferyny w osoczu jest obniżony u pacjentów zakażonych HIV-1 w zależności od postępu choroby. „6 W innym badaniu stwierdzono, że brak laktoferyny (i wydzielniczej Iga) w jamie ustnej osób zakażonych HIV silnie koreluje z częstymi infekcjami w tych obszarach, często obserwowanymi u pacjentów z AIDS.11 Stwierdzono również, że laktoferyna ma „silne” działanie przeciwwirusowe przeciwko replikacji zarówno ludzkiego wirusa HIV, jak i wirusa cytomegalii (CMV) w kilku badaniach in vitro, bez skutków cytopatycznych dla zdrowych komórek.

Oprócz HIV i CMV, dodatkowe badania wykazały, że laktoferyna hamuje infekcję herpes simplex typu 1 zdrowych komórek. To ostatnie prawdopodobnie występuje poprzez zapobieganie wirusowemu przyłączaniu się do zdrowych komórek poprzez blokowanie białek wirusowych i bezpośrednie interakcje immunologiczne z naturalnymi komórkami zabójców, limfocytami i fagocytami.7,8,9,10

Znaczenie laktoferyny w infekcjach wirusowych uzasadnia wiele dalszych badań i wykorzystanie przez klinicystów. Nie ma wątpliwości, że laktoferyna jest kluczową cząsteczką dla organizmu i układu odpornościowego w walce z wirusami i innymi mikrobami, i może być skutecznym suplementem dla osób z infekcjami wirusowymi.

Efekty przeciwnowotworowe

Prawdopodobnie jednym z najbardziej obiecujących zastosowań laktoferyny może być jej potencjał jako nietoksycznego środka adiuwantowego w leczeniu raka. Obszerne badania in-vitro (probówka) i in-vivo z udziałem zwierząt wykazały, że laktoferyna jest silnym środkiem przeciwnowotworowym.

Dwa badania z wykorzystaniem zdrowych ludzkich ochotników wykazały, że spożycie laktoferyny pochodzącej z mleka krowiego miało pozytywne efekty immunoregulacyjne.

Wielokrotne badania z udziałem szczurów i myszy narażonych na działanie toksycznej substancji chemicznej (azoksymetan), o której wiadomo, że powoduje nowotwory w całym przewodzie pokarmowym, podawanej jednocześnie z laktoferyną, wykazały znaczną redukcję rozwoju polipów jelitowych.12,13 Co równie ważne, nie zaobserwowano żadnych toksycznych skutków dla tkanek nabłonka jelitowego. Inne badanie wykazało, że podawanie laktoferyny myszom podatnym na raka, poddawanym działaniu chemikaliów powodujących raka, zmniejszyło liczbę guzów i zahamowało angiogenezę (wytwarzanie nowych naczyń krwionośnych), której guzy potrzebują do przetrwania. Badanie to wykazało również, że laktoferyna „znacząco hamowała” przerzuty komórek rakowych do wątroby i płuc u tych zwierząt.14 Oprócz tego, co wydaje się być bezpośrednimi właściwościami hamującymi raka laktoferyny, dodatkowe badania wykazały, że w niskich stężeniach zwiększała ona toksyczność komórek NK (natural killer) w stosunku do kilku linii komórek rakowych. To pokazuje, że laktoferyna odgrywa systemową rolę w poprawie skuteczności komórek odpornościowych w stosunku do komórek rakowych, jak również bezpośredni efekt poprzez mechanizmy, które nie są w pełni jasne w tym czasie.

Jeszcze inne badanie wykazało, że laktoferyna jest bardzo skuteczna w hamowaniu wzrostu ludzkich komórek raka trzustki. Badacze doszli do wniosku, że laktoferyna „…może stać się jednym z nowych leków z wyboru w terapii adiuwantowej przeciwko rakowi trzustki. „15 Inne opublikowane badania wykazały zarówno bezpośrednie działanie laktoferyny hamujące rozwój nowotworów, jak i ogólnoustrojową poprawę odporności u zwierząt karmionych laktoferyną z nowotworami wywołanymi chemicznie. W jednym z badań, w którym badano wpływ laktoferyny na chemicznie indukowanego raka jelita grubego, stwierdzono, że „nie odnotowano żadnych efektów wskazujących na toksyczność, ale zaobserwowano znaczące zmniejszenie zarówno częstości występowania, jak i liczby gruczolakoraków (guzów) jelita grubego w prawie wszystkich metodach leczenia.”12

Wyniki przeciwbakteryjne

Extensive in-vitro (probówka) i in-vivo
research with animals has shown lactoferrin
to be a powerful anti-cancer agent.

Probably lactoferrin’s best known role is as an iron binding protein. Jest on określany jako hololaktoferyna w jego formie związanej z żelazem i apolaktoferyna w jego formie pozbawionej żelaza. Badania wykazały, że to właśnie forma apolaktoferyny ma najsilniejsze działanie jako środek antybakteryjny. Bezpośrednio związana z wcześniej wspomnianą zdolnością laktoferyny do hamowania pewnych bakterii degradujących zdrowie w jelicie, laktoferyna jest potężnym środkiem przeciwbakteryjnym, który hamuje szeroki zakres bakterii chorobotwórczych i innych mikrobów. Mechanizm wydaje się leżeć w zdolności laktoferyny do wiązania żelaza, ponieważ wiadomo, że ma ona bardzo wysokie powinowactwo do tego metalu. Wiele bakterii chorobotwórczych potrzebuje dostawy wolnego żelaza, aby się rozmnażać – w obecności laktoferyny są one silnie hamowane lub zabijane.

Jedno z badań przyjrzało się laktoferynie jako „naturalnemu antybiotykowi” i odkryło, że laktoferyna zarówno in-vitro jak i in-vivo silnie hamowała toksyczną bakterię helicobacter pylori. Stwierdzili: „Stwierdzono, że laktoferyna bydlęca (krowia) ma znaczącą aktywność przeciwbakteryjną przeciwko helicobacter species in-vitro i in-vivo. „16 W innym badaniu, w którym zastosowano metody in-vitro i in-vivo, dodano laktoferynę do wody pitnej myszy i poddano je działaniu toksycznego mikroba gronkowca. Badanie wykazało, że myszy otrzymujące laktoferynę w ilości 2% kalorii zredukowały infekcje nerek o 40% do 60% i zmniejszyły liczbę bakterii 5- do 12-krotnie. Stwierdzono, że „wyniki sugerują możliwość wykorzystania laktoferyny jako naturalnego białka antybakteryjnego w zapobieganiu infekcjom bakteryjnym. „17 Co ciekawe, niektóre badania wykazały, że laktoferyna pochodząca od krów jest bardziej skuteczna niż laktoferyna pochodząca od ludzi, jeśli chodzi o właściwości antybakteryjne18 (chociaż dobrze wiadomo, że ludzkie mleko matki zapewnia noworodkowi dużą ochronę ze względu na wiele czynników, w tym wysoką zawartość laktoferyny). Kilka badań wykazało, że laktoferyna hamuje szeroki zakres bakterii gram dodatnich i gram ujemnych, drożdży, a nawet niektórych pasożytów jelitowych. Stwierdzono, że cholera, escherichia coli, shigella flexneri, staphylococcus epidermidis, pseudomonas aeruginosa, candida albicans i inne są silnie lub częściowo hamowane w obecności laktoferyny.19,20 (Należy zauważyć, że nie każdy mikrob, który jest patogenny dla ludzi jest hamowany przez laktoferynę).

Może najbardziej obiecujące i interesujące są badania, które wskazują na to, że laktoferyna jest w stanie poprawić skuteczność leczenia antybiotykami w walce z patogennymi mikrobami. Biorąc pod uwagę wymykające się spod kontroli stosowanie antybiotyków i wzrost opornych na antybiotyki szczepów „złych robaków”, jest to bardzo dobra wiadomość. Czy połączenie laktoferyny i antybiotyków byłoby nokautującym ciosem dla niektórych bakterii, które nie są zabijane przez same zabiegi antybiotykowe? Więcej badań jest potrzebnych, ale dowody są bardzo przekonujące.

Laktoferyna jako antyoksydant

Wreszcie, laktoferyna jest antyoksydantem, który wymiata wolne żelazo, pomagając zapobiegać niekontrolowanym reakcjom wolnych rodników opartych na żelazie, chroniąc w ten sposób niektóre komórki przed peroksydacją. Chociaż laktoferyna jest zarówno wymiataczem jak i dawcą żelaza (w zależności od środowiska komórkowego), stwierdzono, że wymiata lub oddaje żelazo w odpowiednich momentach, kiedy organizm potrzebuje reakcji. Przy normalnym fizjologicznym PH laktoferyna ściśle wiąże żelazo, zmniejszając w ten sposób stres oksydacyjny tkanek (spowodowany wytwarzaniem wolnych rodników przez żelazo). Jak można się spodziewać, wykazano, że apolaktoferyna, ale nie holaktoferyna, zapobiega peroksydacji lipidów. Jednak w rzeczywistości istnieją sytuacje, w których żelazo jest potrzebne jako część kontrolowanego systemu generowania rodników tlenowych przez niektóre komórki odpornościowe do zabijania mikroorganizmów. Stwierdzono, że laktoferyna jest dawcą żelaza dla tego systemu w warunkach obniżonego PH.

Wiele badań sugeruje, że laktoferyna zmniejsza stres oksydacyjny. Choroby takie jak rak, choroby serca i AIDS są ściśle związane ze stresem oksydacyjnym albo jako czynnik sprawczy, albo jako czynnik w postępie choroby. W jednym z badań, w którym analizowano rolę białek serwatkowych, multifermentowanych białek serwatkowych i laktoferyny w stresie oksydacyjnym, padło śmiałe stwierdzenie: „Możemy stwierdzić, że białka serwatkowe, laktoferyna i multifermentowana serwatka są dobrymi kandydatami jako dietetyczne inhibitory stresu oksydacyjnego i powinny być rozważane jako potencjalna żywność lecznicza w różnych patologiach, takich jak infekcja HIV i rak.”21 Nie moglibyśmy powiedzieć tego lepiej sami!

Conclusion

Jest mało wątpliwości, że laktoferyna jest głównym znaleźć i potencjalny przełom jako naturalny nietoksyczne leczenie w szeregu dolegliwości człowieka. Chociaż kilka firm jest w stanie produkować laktoferynę w tym czasie, jest tylko jedna firma produkująca formę apolaktoferyny (pozbawioną żelaza) w dużych ilościach. Badania sugerują, że lepsza forma do uzupełnienia jest apolaktoferyna.

William D. Brink jest znanym pisarzem medycznym, fitness i zdrowia dla różnych publikacji. Ukończył Uniwersytet Harvarda ze stopniem naukowym w dziedzinie nauk przyrodniczych i jest regularnym gościem w krajowych programach radiowych i mówcą na różnych konwencjach wokół U.S.

1. Zhang GH, Mann DM, Tsai CM. Neutralization of endotoxin in vitro and in vivo by a human lactoferrin-derived peptide. Infect Immun 1999 Mar;67(3):1353-8.
2. Lee WJ, Farmer JL, Hilty M, Kim YB. The Protective Effects of Lactoferrin Feeding against Endotoxin Lethal Shock in Germfree Piglets. Infect Immun Apr. 1999: Vol 66 No 4, 1421-1426.
3. Zimecki M, Wlaszczyk A, Cheneau P, Brunel AS, Mazurier J, Spik G, Kubler A. Immunoregulatory effects of a nutritional preparation containing bovine lactoferrin taken orally by healthy individuals. Arch Immunol Ther Exp (Warsz) 1998;46(4):231-40.
4. Yamauchi K, Wakabayashi H, Hashimoto S, Teraguchi S, Hayasawa H, Tomita M. Effects of orally administered bovine lactoferrin on the immune system of healthy volunteers. Adv Exp Med Biol 1998;443:261-5.
5. Kruzel ML, Harari Y, Chen CY, Castro GA. The gut. A key metabolic organ chronione przez laktoferyny podczas eksperymentalnego systemowego zapalenia u myszy. Adv Exp Med Biol 1998;443:167-73.
6. Defer MC, Dugas B, Picard O, Damais C. Impairment of circulating lactoferrin in HIV-1 infection. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) 1995 May;41(3):417-21.
7. Puddu P, Borghi P, Gessani S, Valenti P, Belardelli F, Seganti L. Antiviral effect of bovine lactoferrin saturated with metal ions on early steps of human immunodeficiency virus type 1 infection. Int J Biochem Cell Biol 1998 Sep;30(9):1055-62.
8. Superti F, Ammendolia MG, Valenti P, Seganti L. Antirotaviral activity of milk proteins: lactoferrin prevents rotavirus infection in the enterocyte-like cell line HT-29. Med Microbiol Immunol (Berl) 1997 Oct;186(2-3):83-91.
9. Harmsen MC, Swart PJ, de Bethune MP, Pauwels R, De Clercq E, The TH, Meijer DK. Antiviral effects of plasma and milk proteins: lactoferrin shows potent activity against both human immunodeficiency virus and human cytomegalovirus replication in vitro. J Infect Dis 1995 Aug;172(2):380-8.
10. Swart PJ, Kuipers EM, Smit C, Van Der Strate BW, Harmsen MC, Meijer DK. Lactoferrin. Antiviral activity of lactoferrin. Adv Exp Med Biol 1998;443:205-13.
11. Muller F, Holberg-Petersen M, Rollag H, Degre M, Brandtzaeg P, Froland SS. Nonspecific oral immunity in individuals with HIV infection. J Acquir Immune Defic Syndr 1992;5(1):46-51.
12. Tsuda H, Sekine K, Nakamura J, Ushida Y, Kuhara T, Takasuka N, Kim DJ, Asamoto M, Baba-Toriyama H, Moore MA, Nishino H, Kakizoe T. Inhibition of azoxymethane initiated colon tumor and aberrant crypt foci development byvine lactoferrin administration in F344 rats. Adv Exp Med Biol 1998;443:273-84.
13. Ushida Y, Sekine K, Kuhara T, Takasuka N, Iigo M, Tsuda H. Inhibitory effects of bovine lactoferrin on intestinal polyposis in the Apc(Min) mouse. Cancer Lett 1998 Dec 25;134(2):141-5.
14. Yoo YC, Watanabe S, Watanabe R, Hata K, Shimazaki K, Azuma I. Bovine lactoferrin and lactoferricin, a peptide derived from bovine lactoferrin, inhibit tumor metastasis in mice. Jpn J Cancer Res 1997 Feb;88(2):184-90.
15. Sakamoto N. Antitumor effect of human lactoferrin against newly established human pancreatic cancer cell line SPA. Gan To Kagaku Ryoho 1998 Aug;25(10):1557-63.
16. Dial EJ, Hall LR, Serna H, Romero JJ, Fox JG, Lichtenberger LM. Antibiotic properties of bovine lactoferrin on Helicobacter pylori. Dig Dis Sci 1998 Dec;43(12):2750-6.
17. Bhimani RS, Vendrov Y, Furmanski P. Influence of lactoferrin feeding and injection against systemic staphylococcal infections in mice. J Appl Microbiol 1999 Jan;86(1):135-44.
18. Vorland LH, Ulvatne H, Andersen J, Haukland H, Rekdal O, Svendsen JS, Gutteberg TJ. Lactoferricin of bovine origin is more active than lactoferricins of human, murine and caprine origin. Scand J Infect Dis 1998;30(5):513-7.
19. Percival M. Intestinal Health. Clin. Nutri. Insights. 1997, Vol 5. No 5, 1-6.
20. Kuwata H, Yip TT, Tomita M, Hutchens TW. Direct evidence of the generation in human stomach of an antimicrobial peptide domain (lactoferricin) from ingested lactoferrin. Biochim Biophys Acta 1998 Dec 8;1429(1):129-41.
21. Stella V, Postaire E. Evaluation of the antiradical protector effect of multifermented milk serum with reiterated dosage in rats. C R Seances Soc Biol Fil 1995;189(6):1191-7.

.