Beskrivning
T7-promotorer kan producera höga transkriptionsnivåer i E. coli när T7 RNAP är närvarande. Den andra fördelen med T7-promotorer är att de inte känns igen av E. coli RNAP vilket gör att T7-promotorer kan regleras oberoende av E. coli-promotorer. Eftersom en aktiv stark T7-promotor helt kan stoppa E. coli:s tillväxt på grund av T7 RNAP:s höga resursförbrukning (t.ex. nukleotider) är det vanligtvis nödvändigt att reglera nivåerna av antingen T7 RNAP eller T7-promotorn eller båda. T7-promotorfamiljen innehåller därför både konstitutiva promotorer och negativt reglerade promotorer som kan stängas av av ett repressorprotein. Den vanligaste cellstammen att använda med ett T7-promotorsystem är BL21(DE3) som är en E. coli B-stam som innehåller en λ-lysogen med en inducerbar T7 RNAP-gen på kromosomen. Det är dock möjligt att konstruera många andra E. coli-stammar för att villkorligt uttrycka T7 RNAP.
Hämtning av T7-promotorsamlingen
Sekvenserna för T7-promotorer finns i tabellen nedan. För att erhålla det fysiska DNA:t rekommenderar vi två tillvägagångssätt –
Via de novo-syntes: Eftersom promotorerna är relativt korta sekvenser kan de beställas som två enkelsträngade överlappande oligon som glödgas och förlängs för att konstruera de fullständiga promotorerna. Se detta OpenWetWare-protokoll om hur man konstruerar delar genom glödgning och förlängning av oligon. Alternativt kan promotorerna beställas som korta gener från ett företag som Geneart.
Via Registry distribution: Vissa av promotorerna finns tillgängliga i den aktuella registerdistributionen, se kolumnen för tillgänglighet i tabellen nedan.
Design & Konstruktion
Sekvenslogotypen för de starka promotorerna från bakteriofagets T7-genom.
T7-promotorerna i samlingen har designats och konstruerats av flera olika grupper. Det finns dock endast T7 RNAP och därmed endast en typ av T7-promotor. Konsensussekvensen för T7-promotorer kan härledas från sekvenslogotypen för T7-promotorer som visas till höger.
T7-promotorsamling
| Namn | Beskrivning | Promotorsekvens | Positiva Regulatorer |
Negativa Regulatorer |
Längd | Doc | Status | |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| BBa_I712074 | T7-promotor (stark promotor från T7-bakteriofag) | . . . agggaatacaagctacttgttctttttttgca | 46 | 1938 | I lager | |||
| BBa_I719005 | T7 Promoter | taatacgactcactatagggaga | 23 | 7912 | I lager | |||
| BBa_J34814 | T7 Promoter | gaatttaatacgactcactatagggaga | 28 | 1190 | Inte i lager | |||
| BBa_J64997 | T7 konsensus -10 och resten | taatacgactcactatagg | 19 | 10154 | Det är komplicerat | |||
| BBa_K113010 | överlappande T7-promotor | . . gagtcgtattaatatacgactcactatagggg | 40 | 1553 | Det är komplicerat | |||
| BBa_K113011 | mer överlappande T7-promotor | . . agtgagtcgtactacgactcactatagggg | 37 | 1601 | Det är komplicerat | |||
| BBa_K113012 | svaga överlappande T7-promotor | . . gagtcgtattaatacacgactctctctatagggg | 40 | 1630 | Det är komplicerat | |||
| BBa_K1614000 | T7-promotor för uttryck av funktionellt RNA | taatacgactcactatag | 18 | 5219 | I lager | |||
| BBa_K3511008 | C62-T7-promotor | taatacgactcacaatcgcggag | 23 | |||||
| BBa_K3633015 | T7-promotor | taatacacgactcactatagg | 19 | Det är komplicerat | ||||
| BBa_K525998 | Promotor T7 och RBS | . . . atacgactcactatataggagggaaagaggagaaa | 32 | 3036 | I lager | |||
| BBa_R0085 | T7 Consensus Promoter Sequence | taatacgactcactatagggaga | 23 | 2072 | I lager | |||
| BBa_R0180 | T7 RNAP-promotor | ttatacacgactcactatagggaga | 23 | 1654 | Inte i lager | |||
| BBa_R0181 | T7 RNAP promoter | gaatacgactcactatagggaga | 23 | 1651 | Inte i lager | |||
| BBa_R0182 | T7 RNAP-promotor | taatacgtctcactatagggaga | 23 | 1653 | Inte i lager i lager | |||
| BBa_R0183 | T7 RNAP-promotor | tcatacacgactcactatagggaga | 23 | 1653 | Inte i lager | |||
| BBa_R0184 | T7-promotor (lacI repressible) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1176 | Inte i lager | |||
| BBa_R0185 | T7-promotor (lacI reprimerbar) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1888 | Inte i lager | |||
| BBa_R0186 | T7-promotor (lacI reprimerbar) | . . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Inte i lager | |||
| BBa_R0187 | T7-promotor (lacI reprimerbar) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Inte i lager | |||
| BBa_Z0251 | T7 stark promotor | . . taatacgactcactatatagggagaccacaac | 35 | 1887 | Inte i lager | |||
| BBa_Z0252 | T7 svaga bindningar och processivitet | . . . taattgaactcacactaaagggagaccacagc | 35 | 1667 | Inte i lager | |||
| BBa_Z0253 | T7 svagt bindande promotor | . . . cgaagtaatacacgactcactattagggaaga | 35 | 1400 | Inte i lager |