Anticorpo fluorescente directo

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Um anticorpo fluorescente directo (DFA ou dFA), também conhecido como “imunofluorescência directa”, é um anticorpo que foi marcado num teste de anticorpos fluorescentes directos. Seu nome deriva do fato de que ele testa diretamente a presença de um antígeno com o anticorpo marcado, ao contrário do western blotting, que usa um método indireto de detecção, onde o anticorpo primário liga o antígeno alvo, com um anticorpo secundário direcionado contra o primário, e uma etiqueta presa ao anticorpo secundário.

Esfregaço de impressão cerebral direta com coloração de FA em camundongos revela a presença da bactéria Chlamydia psittaci. 400X.

Kits de teste comercial de DFA estão disponíveis, que contêm anticorpos fluorescentes, concebidos para visar especificamente antigénios únicos presentes nas bactérias ou vírus, mas não presentes nos mamíferos (Eukaryotes). Esta técnica pode ser usada para determinar rapidamente se um indivíduo tem uma infecção viral ou bacteriana específica.

No caso de vírus respiratórios, muitos dos quais têm sintomas amplos semelhantes, a detecção pode ser feita usando amostras de lavagem nasal do indivíduo com a suspeita de infecção. Embora se possa obter a perda de células no tracto respiratório, muitas vezes é em número reduzido, pelo que se pode adoptar um método alternativo onde a cultura celular compatível pode ser exposta a amostras de lavagem nasal infectadas, pelo que, se o vírus estiver presente, pode crescer até uma maior quantidade, o que pode então dar uma leitura positiva ou negativa mais clara.

Como em todos os tipos de microscopia de fluorescência, é necessário determinar o comprimento de onda de absorção correcto para excitar a etiqueta de fluoróforo ligada ao anticorpo, e detectar a fluorescência emitida, que indica que células são positivas para a presença do vírus ou bactérias a serem detectadas.

A imunofluorescência directa pode ser usada para detectar depósitos de imunoglobulinas e proteínas complementares em biópsias de pele, rins e outros órgãos. A sua presença é indicativa de uma doença auto-imune. Quando a pele não exposta ao sol é testada, um IF directo positivo (o chamado teste da banda de lúpus) é uma evidência de lúpus eritematoso sistémico. O anticorpo directo fluorescente também pode ser usado para detectar infecções parasitárias, como foi pioneiro de Sadun, et al. (1960).

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