Promotores/Catalog/T7

Descrição

T7 promotores podem produzir altos níveis de transcrição em E. coli quando o T7 RNAP está presente. A segunda vantagem dos promotores T7 é que eles não são reconhecidos por E. coli RNAP tornando os promotores T7 capazes de regulação independente dos promotores E. coli. Uma vez que um promotor T7 forte e activo pode parar completamente o crescimento de E. coli devido ao alto nível de consumo de recursos (por exemplo, nucleotídeos) pelo RNAP T7, é normalmente necessário regular os níveis do RNAP T7 ou do promotor T7 ou ambos. Como tal a família de promotores T7 contém tanto promotores constitutivos como promotores regulados negativamente que podem ser desligados por uma proteína repressora. A estirpe celular mais comum para usar com um sistema promotor T7 é BL21(DE3) que é uma estirpe de E. coli B que contém um lisógeno λ com um gene T7 RNAP induzível no cromossoma. No entanto, é possível engendrar muitas outras linhagens de E. coli para expressar condicionalmente o gene T7 RNAP.

Obtendo a coleção de promotores T7

As sequências dos promotores T7 podem ser encontradas na tabela abaixo. Para obter o DNA físico, recomendamos duas abordagens –
Via de nova síntese: Uma vez que os promotores são sequências relativamente curtas, podem ser ordenados como dois oligo’s sobrepostos de uma só corda são recozidos e estendidos para construir os promotores completos. Veja este protocolo OpenWetWare sobre como construir peças através do recozimento e extensão de oligo. Alternativamente os promotores podem ser encomendados como genes curtos de uma empresa como Geneart.

Via a distribuição do Registro: Alguns dos promotores estão disponíveis na atual distribuição de registro, veja a coluna de disponibilidade na tabela abaixo.

Design & Construção