Periodic acid-Schiff (PAS) är en annan vanligt förekommande specialfärgning i histologilaboratoriet.
Vad färgar PAS?
(1) Polysackarider: Tekniken används ofta för att identifiera polysackarider – dessa makromolekyler består av monosackaridenheter som är sammanfogade med kovalenta bindningar. Den viktigaste polysackariden som identifieras genom histologisk färgning i vävnadssektioner från människor och djur är glykogen. Denna finns i många vävnader, bland annat i skelettmuskel, hjärtmuskel, lever och njurar.
(2) Neutrala slemsubstanser: Det används också ofta för att färga och identifiera neutrala slemsubstanser. Dessa kan omfatta glykoproteiner, glykolipider och neutrala muciner, som produceras av epitelceller i olika organ.
(3) Vävnadskällarmembran: Dessa PAS-positiva tunna lager av retikulär bindväv förankrar och stödjer epitel och endotel till underliggande bindväv.
(4) Svamporganismer: Cellväggarna hos vissa svamporganismer innehåller höga halter av kolhydrater och är också PAS-positiva. Detta fungerar dock endast på levande svampar.
Färgens allmänna principer
PAS-teknikens reaktivitet bygger på strukturen hos monosackaridenheterna.
Den första reaktionen i färgningen innebär att periodisk syra agerar som oxidationsmedel för att oxidera kol-till-kol-bindningarna mellan två intilliggande hydroxylgrupper. Detta ger upphov till Schiff-reaktiva aldehydgrupper.
I den andra reaktionen reagerar vävnadsdelen med Schiff-reagens. Detta består av en blandning av basiskt fuchsin, saltsyra och natriummetabisulfit. Det basiska fuchsinet i blandningen reagerar med nybildade aldehydgrupper i vävnaden för att producera en ljus magentafärg.
När snittet sköljs i vatten producerar slutligen bundna fuchsinmolekyler i vävnaden då en ljus magentafärg. Färgens intensitet är proportionell mot koncentrationen av hydroxylgrupper som ursprungligen fanns i monosackaridenheterna.
Haematoxylin används sedan vanligtvis som en motfärgning för att visualisera andra vävnadselement. När PAS används för att påvisa svamporganismer föredras dock en ljusgrön motfärgning.
Diastas (alfa-amylas) kan också användas för att underlätta diagnosen av sjukdomar som rör lagring av glykogen. Diastas hydrolyserar stärkelse, glykogen och nedbrytningsprodukter från dessa vävnadspolysackarider. Jämfört med ett objektglas med vävnad som innehåller glykogen kommer ett objektglas med diastasextraktion inte att ha någon synlig PAS-färgning.
| Histologiskt kännetecken | Färg med PAS-färg |
| Glykogen, källarmembran, slemsubstanser, svamporganismer | Magenta |
| Kärnor | Blått (med hematoxylin motfärgning) |
| Andra vävnadsdelar | Grönt (med ljusgrön motfärgning) |
Vem använder PAS-färg?
Denna färgning används i stor utsträckning för både diagnostik och forskning. Till exempel kan forskare som studerar sjukdomar som rör glykogenlagring eller sjukdomar i basalmembranet rutinmässigt undersöka PAS-färgade vävnadssektioner för att utvärdera dessa respektive element i vävnader av intresse.
I diagnostiska laboratorier använder patologer ofta denna färg för att hjälpa till att besvara frågor som kan uppstå efter att ha undersökt rutinmässigt hematoxylin- och eosin-färgade sektioner. Den kan särskilt användas för att hjälpa till med diagnosen av:
- Glykogenlagringssjukdomar: Dessa är tillstånd där alltför stora mängder glykogen lagras i levern, musklerna eller njurarna. PAS används ofta rutinmässigt på kliniken för att påvisa glykogenansamling i biopsier av dessa vävnader.
- Tumörer: Glykogengranuler kan också finnas i vissa tumörer, inklusive några av dem som uppstår i vävnader som bukspottkörtel, lunga och urinblåsa.
- Svampinfektion: PAS kan användas för att visualisera vissa svamporganismer i vävnadssektioner.
- Basismembran: Eftersom PAS kan användas för att framhäva basalmembranen i vävnader kan det användas för att identifiera sjukdomar där basalmembranen är svag eller fungerar felaktigt – till exempel vid vissa glomerulära sjukdomar i njurarna.
Vad används PAS oftast till i ditt labb?
Har detta hjälpt dig? Dela gärna med dig till ditt nätverk.