Segundo paso: Procesamiento del tejido
Después de que el donante haya pasado por el proceso de selección, se dan varios pasos para garantizar el procesamiento estandarizado del tejido del aloinjerto. Todos los tejidos se procesan con técnicas «asépticas», que incorporan técnicas estándar de quirófano. Cuando se obtienen tejidos del donante, el término cosecha se ha sustituido respetuosamente por recuperación. Existen límites de tiempo para la recuperación de los tejidos. Se establece un plazo de 24 horas durante el cual los tejidos corporales deben recuperarse según las normas de la AATB.
La recuperación se realiza con mayor frecuencia en un quirófano o en un centro de recuperación designado. Ocasionalmente, puede realizarse en un depósito de cadáveres. Un equipo de técnicos ayuda en este procedimiento quirúrgico. Las técnicas de quirófano, incluyendo la preparación y el drapeado del donante, son similares a las de los protocolos operativos estándar. Se utiliza una técnica estéril con paños, batas, guantes e instrumentos estériles. Cada tejido se obtiene, se cultiva, se envuelve, se etiqueta, se sella y se envía en contenedores específicos a temperaturas de congelación. La mayoría de estos tejidos se recuperan con esta técnica aséptica de recuperación de tejidos. La contaminación puede ocurrir durante este proceso o durante el traslado a los contenedores antes de llegar al banco de tejidos. Esta técnica aséptica no debe considerarse un proceso estéril. Se ha documentado que la contaminación proviene del tracto gastrointestinal o respiratorio del donante (contaminación agonal).10,12 Los brotes recientes han documentado esta contaminación después de la muerte con la descomposición del sistema gastrointestinal, así como la recuperación después de la asistolia en momentos tardíos fuera de las normas de los bancos de tejidos.23
Los bancos de tejidos examinan la biocarga de la superficie de los tejidos y del líquido tisular que los acompaña. La biocarga se define como el número de organismos contaminados que se encuentran en una cantidad determinada de material antes de someterse a un procedimiento de esterilización. El tejido de aloinjerto tiene una superficie física compleja con grietas y fisuras que dificultan la eliminación de todos los patógenos potenciales. Se ha documentado que los cultivos de hisopos superficiales sólo tienen una sensibilidad de entre el 70% y el 92%.26 La Convención Farmacopea de EE.UU.,18 la norma de la industria médica para las pruebas de esterilidad y otros procedimientos de control de calidad, ha declarado que los cultivos de hisopos no deben utilizarse como prueba definitiva de esterilización. Los cultivos deben utilizarse para controlar los procesos de esterilización previamente validados. Algunos bancos de tejidos rechazan los tejidos si hay una gran cantidad de carga biológica cuando reciben inicialmente el tejido.
Al procesar los tejidos, los bancos de tejidos se esfuerzan por limpiar y esterilizar los tejidos para el trasplante. La esterilización se define como un proceso que mata todas las formas de vida, especialmente los microorganismos. La esterilidad se ha expresado como una probabilidad matemática de riesgo. La FDA ha establecido un nivel de seguro de esterilidad (SAL) 10-3 como adecuado para los dispositivos médicos biológicos implantables. Esto significa que hay una posibilidad (probabilidad) de 1 entre 1000 de que pueda existir un microbio vivo viable dentro o sobre el dispositivo implantable. Los aloinjertos musculoesqueléticos convencionales son clasificados rutinariamente como HCT/P por la FDA/Centro para la Evaluación de Productos Biológicos en Investigación (CBER). La Asociación para el Avance de la Instrumentación Médica (AAMI)4 establece que un SAL de 10-6 es apropiado para los dispositivos médicos. Actualmente, la AATB exige un SAL de 10-6 como norma, diferente a la de la FDA.3
Los principales bancos de tejidos de Estados Unidos utilizan actualmente diferentes técnicas de esterilización y procesamiento validado. Se siguen desarrollando nuevas técnicas de procesamiento para mejorar la seguridad de los tejidos. La mayoría de los procesos de esterilización se basan en el tratamiento de los tejidos «pinchados» con diferentes patógenos o los tejidos son emergidos o sumergidos en fluidos que contienen los patógenos de interés. Biológicamente, esto no es lo mismo que un tejido que ha sido infectado «sistémicamente». La validez de estas técnicas de prueba necesita ser estudiada más a fondo.
La FDA es el organismo que gobierna en última instancia la industria de los bancos de tejidos, pero no establece específicamente qué técnica de procesamiento de esterilización es la mejor o cuál debe utilizarse. Dentro de las normas recientes para la GTP, la FDA exige que cualquier establecimiento de bancos de tejidos que haga una declaración escrita de esterilidad de aloinjertos con su etiquetado estará sujeto a inspecciones sorpresa y a la revisión de la FDA.19,22 Cada banco de tejidos debe tener datos validados para sus declaraciones de esterilidad por su método individual de procesamiento de tejidos. La mayoría de los bancos de tejidos utilizan una fórmula propia de diferentes detergentes biológicos, alcohol, antibióticos y peróxido de hidrógeno.
La tabla 9-1 enumera ejemplos de algunos de los principales procesos de los bancos de tejidos, incluyendo fórmulas como Allowash XG de Lifenet, que utiliza una técnica de fregado y pasos de descontaminación intensivos con alcohol, antibióticos y peróxido de hidrógeno. El proceso de tejido BioCleanse de Regeneration Technologies, Inc. (RTI), utiliza un proceso automatizado de vacío-presión a baja temperatura con peróxido de hidrógeno y alcohol. La Musculoskeletal Transplantation Foundation (MTF) utiliza un proceso de purificación de tejidos de aloinjertos (ATP), un proceso de detergente no cónico, peróxido de hidrógeno y alcohol con un cóctel de antibióticos. Tissue Bank International (TBI) cuenta con TranZgraft, un proceso de esterilización propio utilizado a baja temperatura. Allosource utiliza Validated Sterilizer como proceso de desinfección. Estos bancos de tejidos han validado sus procesos individuales de esterilización patentados a un nivel SAL de 10-6
Cualquier método de procesamiento de tejidos debe ser eficaz para inactivar los virus y matar las bacterias. Debe penetrar eficazmente en el tejido y eliminarse de forma segura del mismo, preservando al mismo tiempo las propiedades mecánicas y biológicas del tejido.
No hay ninguna técnica probada que sea más eficaz para procesar o esterilizar el tejido de aloinjerto para uso humano. Se necesitan estudios a largo plazo para evaluar las diferentes técnicas de procesamiento a lo largo del tiempo. No todos los aloinjertos musculoesqueléticos de tejidos blandos pueden esterilizarse con seguridad. Los condrocitos de los aloinjertos de cartílago articular pueden sufrir daños irreparables con las diferentes técnicas de procesamiento.
La radiación gamma es un agente de esterilización muy eficaz que genera radicales libres, que pueden afectar negativamente a la estructura del colágeno. Se ha documentado que las dosis más altas de radiación son perjudiciales para el tejido y, en este momento, los bancos de tejidos suelen utilizar dosis bajas de radiación para eliminar los contaminantes de la superficie.6,9
Unos pocos bancos de tejidos utilizan un proceso de liofilización. Esto permite que el tejido del aloinjerto se almacene a temperatura ambiente en un paquete sellado. Este proceso de lipofilización congela el tejido y el contenido de agua se reduce a menos del 6% de su peso inicial. Esto se hace mediante un proceso de secado primario llamado sublimación, al que sigue un proceso de secado secundario llamado desorción. Esta reducción del contenido de agua no favorece ninguna actividad biológica ni reacciones químicas en el tejido. En general, los aloinjertos liofilizados no se utilizan habitualmente para aplicaciones de medicina deportiva en Estados Unidos. Se utilizan ampliamente para procedimientos de reconstrucción no ortopédicos en los campos de la neurocirugía y la urología.