Kettes lépés: Szövetfeldolgozás
Azt követően, hogy a donor átesett a szűrési folyamaton, több lépést kell tenni az allograft szövet szabványos feldolgozásának biztosítása érdekében. Minden szövetet “aszeptikus” technikával dolgoznak fel, amely magában foglalja a standard műtéti technikákat. Amikor a szöveteket a donortól nyerik, a gyűjtés kifejezést tisztelettudóan a visszanyerés kifejezéssel helyettesítették. A szövetek kinyerésére határidők vannak. Létrehoztak egy 24 órás ablakot, amely alatt a testszöveteket az AATB szabványok szerint kell kinyerni.
A kinyerés leggyakrabban egy műtőben vagy egy kijelölt kinyerési központban történik. Alkalmanként ez hullaházban is történhet. Ebben a műtéti eljárásban egy technikusokból álló csapat segít. A műtéti technikák, beleértve a donor előkészítését és drapériázását, hasonlóak a standard műtéti protokollokhoz. Steril technikát alkalmaznak a drapériákkal, köpenyekkel, kesztyűkkel és steril műszerekkel. Minden egyes szövetet beszereznek, tenyésztik, becsomagolnak, felcímkéznek, lezárnak és fagyasztási hőmérsékleten, erre a célra szolgáló konténerekben szállítják. A szövetek többségét ezzel az aszeptikus technikával nyerik ki. A folyamat során vagy a szövetbankba való megérkezést megelőzően a konténerekbe történő szállítás során kontamináció léphet fel. Ez az aszeptikus technika nem tekinthető steril eljárásnak. Dokumentálták, hogy a kontamináció a donor gyomor-bélrendszeréből vagy légzőrendszeréből származik (agonális kontamináció).10,12 A közelmúltban történt kitörések dokumentálták ezt a kontaminációt a halál után a gyomor-bélrendszer összeomlásával, valamint a szövetbanki szabványokon kívüli, késői időpontban bekövetkezett aszisztolé utáni visszanyerést.23
A szövetbankok vizsgálják a kapott szövetek szövetfelületének és a kísérő szövetfolyadéknak a biológiai terheltségét. A biológiai terheltséget úgy határozzák meg, mint a fertőzött organizmusok számát, amelyeket egy adott mennyiségű anyagban találnak, mielőtt sterilizálási eljárásnak vetik alá. Az allograft szövetnek összetett fizikai felülete van repedésekkel és repedésekkel, amelyek megnehezítik az összes potenciális kórokozó eltávolítását. A felületi tamponkultúrák dokumentáltan csak 70-92%-os érzékenységűek.26 Az Egyesült Államok Gyógyszerkönyvi Egyezménye18 , az orvosi ipar sterilitásvizsgálatra és egyéb minőségellenőrzési eljárásokra vonatkozó szabványa kimondta, hogy a tamponkultúrákat nem szabad a sterilizáció végleges bizonyítására használni. A tenyészeteket a korábban validált sterilizálási folyamatok ellenőrzésére kell használni. Egyes szövetbankok visszautasítják a szöveteket, ha a szövetek kezdeti átvételekor nagy mennyiségű biológiai terhelést tapasztalnak.
A szövetfeldolgozás során a szövetbankok arra törekszenek, hogy a transzplantációra szánt szöveteket megtisztítsák és sterilizálják. A sterilizálás olyan folyamat, amely elpusztítja az élet minden formáját, különösen a mikroorganizmusokat. A sterilitást matematikai kockázati valószínűségként fejezték ki. Az FDA 10-3 sterilitásbiztosítási szintet (SAL) állapított meg megfelelőnek a beültethető orvosi biológiai eszközök esetében. Ez azt jelenti, hogy 1 az 1000-hez az esélye (valószínűsége) annak, hogy egy élő, életképes mikroba a beültethető eszközben vagy az eszközön létezhet. A hagyományos izom- és csontrendszeri allotranszplantátumokat az FDA/Center for Biologics Evaluation in Research (CBER) rutinszerűen a HCT/P kategóriába sorolja. Az Association for the Advancement of Medical Instrumentation (AAMI)4 szerint az orvostechnikai eszközök esetében a 10-6-os SAL megfelelő. Jelenleg az AATB 10-6-os SAL-t követel meg szabványként, ami eltér az FDA által előírttól.3
Az Egyesült Államok nagy szövetbankjai jelenleg különböző sterilizálási és validált feldolgozási technikákat alkalmaznak. A szövetek biztonságának javítása érdekében folyamatosan fejlesztik az újabb feldolgozási technikákat. A legtöbb sterilizálási eljárás a különböző kórokozókkal “megspékelt” szövetek kezelésén alapul, vagy a szöveteket az érdeklődésre számot tartó kórokozókat tartalmazó folyadékokba merítik vagy mártják. Biológiailag ez nem azonos a “szisztémásan” fertőzött szövetekkel. Ezeknek a vizsgálati technikáknak az érvényessége további tanulmányozást igényel.
Az FDA a szövetbank-iparág végső irányító szerve, de nem mondja ki konkrétan, hogy melyik sterilizálási feldolgozási technika a legjobb, vagy melyiket kell használni. A GTP-re vonatkozó legújabb szabályokon belül az FDA előírja, hogy minden olyan szövetbankot, amely az allograft sterilitására vonatkozó írásbeli nyilatkozatot tesz a címkézéssel együtt, az FDA meglepetésszerű ellenőrzéseknek és felülvizsgálatnak veti alá.19,22 Minden szövetbanknak validált adatokkal kell rendelkeznie a sterilitásra vonatkozó nyilatkozataihoz az egyes szövetfeldolgozási módszereik szerint. A legtöbb szövetbank különböző biológiai tisztítószerek, alkohol, antibiotikumok és hidrogén-peroxid szabadalmaztatott formuláját használja.
A 9-1. táblázat példákat sorol fel néhány fontosabb szövetbanki eljárásra, köztük olyan formulákat, mint a Lifenet által alkalmazott Allowash XG, amely súrolási technikát és alkohol, antibiotikumok és hidrogén-peroxid segítségével végzett intenzív fertőtlenítési lépéseket alkalmaz. A BioCleanse szövetkezelési eljárás a Regeneration Technologies, Inc. (RTI), vákuumnyomásos, alacsony hőmérsékletű automatizált eljárást alkalmaz hidrogén-peroxiddal és alkohollal. Az Musculoskeletal Transplantation Foundation (MTF) egy allograft szövettisztítási eljárást (ATP), egy nem-konikus mosószert, hidrogén-peroxidot és alkoholt tartalmazó eljárást használ antibiotikum-koktéllal. A Tissue Bank International (TBI) TranZgraft, egy saját fejlesztésű, alacsony hőmérsékleten alkalmazott sterilizálási eljárás. Az Allosource validált sterilizálót használ fertőtlenítési eljárásként. Ezek a szövetbankok 10-6
SAL szintre validálták egyedi, szabadalmaztatott sterilizálási eljárásaikat
Minden szövetfeldolgozási módszernek hatékonynak kell lennie a vírusok inaktiválására és a baktériumok elpusztítására. Hatékonyan be kell hatolnia a szövetbe, és biztonságosan el kell távolítani a szövetből, miközben megőrzi a szövet mechanikai és biológiai tulajdonságait.
Nincs bizonyítottan hatékonyabb technika az emberi felhasználásra szánt allograft szövetek feldolgozására vagy sterilizálására. Hosszú távú vizsgálatokra van szükség a különböző feldolgozási technikák időbeli értékeléséhez. Nem minden lágyszöveti mozgásszervi allograft sterilizálható biztonságosan. Az ízületi porc allograftokban lévő kondrociták helyrehozhatatlanul károsodhatnak a különböző feldolgozási technikákkal.
A gamma-sugárzás nagyon hatékony sterilizálószer, amely szabad gyököket hoz létre, amelyek károsan befolyásolhatják a kollagén szerkezetét. A nagyobb sugárdózisok dokumentáltan károsak a szövetekre, ezért jelenleg a szövetbankok általában kis dózisú sugárzást alkalmaznak a felületi szennyeződések eltávolítására.6,9
Néhány szövetbank alkalmaz fagyasztva szárítási eljárást (liofilizálás). Ez lehetővé teszi, hogy az allograft szövetet szobahőmérsékleten, lezárt csomagolásban tárolják. Ez a liofilizációs eljárás megfagyasztja a szövetet, és a víztartalom a kezdeti súlyának kevesebb mint 6%-ára csökken. Ez egy szublimációnak nevezett elsődleges szárítási folyamattal történik, amelyet egy deszorpciónak nevezett másodlagos szárítási folyamat követ. A víztartalomnak ez a csökkenése nem támogatja a szövet biológiai aktivitását vagy kémiai reakcióit. Általában a fagyasztva szárított allograftokat az Egyesült Államokban nem használják sportorvosi alkalmazásokban. Széles körben használják őket nem ortopédiai rekonstrukciós eljárásokhoz az idegsebészeti és urológiai területeken.