Periodic acid-Schiff (PAS) è un altro colorante speciale comunemente usato nel laboratorio di istologia.
Cosa colora la PAS?
(1) Polisaccaridi: La tecnica è comunemente usata per identificare i polisaccaridi – queste macromolecole sono composte da unità di monosaccaridi unite da legami covalenti. Il principale polisaccaride identificato tramite colorazione istologica in sezioni di tessuto umano e animale è il glicogeno. Questo è presente in numerosi tessuti, tra cui il muscolo scheletrico, il muscolo cardiaco, il fegato e il rene.
(2) Sostanze mucose neutre: È anche comunemente usato per colorare e identificare le sostanze neutre del muco. Queste possono includere glicoproteine, glicolipidi e mucine neutre, che sono prodotte dalle cellule epiteliali in diversi organi.
(3) Membrane basali del tessuto: Questi sottili strati PAS-positivi di tessuto connettivo reticolare ancorano e sostengono l’epitelio e l’endotelio al tessuto connettivo sottostante.
(4) Organismi fungini: Le pareti cellulari di alcuni organismi fungini contengono alti livelli di carboidrati, e si colorano anche di PAS-positivo. Tuttavia, questo funziona solo su funghi viventi.
Principi generali della colorazione
La reattività della tecnica PAS si basa sulla struttura delle unità monosaccaridiche.
La prima reazione nella colorazione coinvolge un acido periodico che agisce come agente ossidante per ossidare i legami carbonio-carbonio tra due gruppi idrossilici adiacenti. Questo produce gruppi aldeidici reattivi di Schiff.
Nella seconda reazione, la sezione del tessuto reagisce con il reagente di Schiff. Questo comprende una miscela di fucsina basica, acido cloridrico e metabisolfito di sodio. La fucsina basica nella miscela reagisce con i gruppi aldeidici appena formati nel tessuto per produrre un colore magenta brillante.
Infine, quando la sezione viene risciacquata in acqua, le molecole di fucsina legate nel tessuto producono un colore magenta brillante. L’intensità del colore è proporzionale alla concentrazione di gruppi idrossilici originariamente presenti nelle unità monosaccaridiche.
L’ematossilina è poi tipicamente usata come contro-colore per visualizzare altri elementi del tessuto. Quando la PAS viene usata per dimostrare gli organismi fungini, tuttavia, si preferisce una controcolorazione verde chiaro.
La digestione della diastasi (alfa-amilasi) può anche essere usata per aiutare nella diagnosi delle malattie da accumulo di glicogeno. La diastasi idrolizza l’amido, il glicogeno e i prodotti di degradazione originati da questi polisaccaridi del tessuto. Se confrontato con un vetrino di tessuto contenente glicogeno, un vetrino con estrazione di diastasi non avrà alcuna macchia PAS visibile.
| Caratteristica istologica | Colore con macchia PAS |
| Glicogeno, membrane basali, sostanze mucose, organismi fungini | Magenta |
| Nuclei | Blu (con controcolorazione ematossilina) |
| Altri elementi del tessuto | Verde (con controcolorazione verde chiaro) |
Chi usa la colorazione PAS?
Questa colorazione è ampiamente utilizzata sia per scopi diagnostici che di ricerca. Per esempio, i ricercatori che studiano le malattie da accumulo di glicogeno o le malattie della membrana basale possono esaminare di routine sezioni di tessuto colorate con la PAS per valutare questi rispettivi elementi nei tessuti di interesse.
Nei laboratori diagnostici, i patologi spesso usano questa colorazione per aiutare a rispondere a domande che possono sorgere dopo aver esaminato sezioni di routine colorate con ematossilina ed eosina. In particolare, può essere usato per aiutare nella diagnosi di:
- Malattie da accumulo di glicogeno: Queste sono condizioni in cui quantità eccessive di glicogeno sono immagazzinate nel fegato, nei muscoli o nei reni. La PAS è spesso usata di routine in clinica per dimostrare l’accumulo di glicogeno nelle biopsie di questi tessuti.
- Tumori: I granuli di glicogeno possono anche essere presenti in alcuni tumori, compresi alcuni di quelli che sorgono in tessuti come il pancreas, il polmone e la vescica.
- Infezione fungina: La PAS può essere usata per visualizzare alcuni organismi fungini in sezioni di tessuto.
- Membrane basali: Poiché la PAS può essere usata per evidenziare le membrane basali dei tessuti, può essere usata per identificare disturbi in cui c’è debolezza o cattivo funzionamento delle membrane basali – come nel caso di alcune malattie glomerulari nel rene.
Per cosa viene usata più comunemente la PAS nel tuo laboratorio?
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