Beschrijving
T7-promotors kunnen hoge niveaus van transcriptie in E. coli produceren wanneer T7 RNAP aanwezig is. Het tweede voordeel van T7-promotors is dat ze niet worden herkend door E. coli RNAP, waardoor T7-promotors onafhankelijk van E. coli-promotors kunnen worden gereguleerd. Aangezien een actieve sterke T7-promoter de groei van E. coli volledig kan stoppen als gevolg van het hoge verbruik van hulpbronnen (bv. nucleotiden) door de T7 RNAP, is het gewoonlijk nodig het niveau van ofwel de T7 RNAP, ofwel de T7-promoter, ofwel van beide te reguleren. Als zodanig bevat de T7-promoterfamilie zowel constitutieve promotors als negatief gereguleerde promotors die door een repressoreiwit kunnen worden uitgeschakeld. De meest gebruikelijke celstam om met een T7-promotorsysteem te gebruiken is BL21(DE3), een E. coli B-stam die een λ lysogeen met een induceerbaar T7 RNAP-gen op het chromosoom bevat. Het is echter mogelijk om veel andere E. coli-stammen te ontwikkelen om T7 RNAP conditioneel tot expressie te brengen.
Het verkrijgen van de T7-promotercollectie
De sequenties van de T7-promotors zijn te vinden in de onderstaande tabel. Om het fysieke DNA te verkrijgen, bevelen wij twee benaderingen aan –
Via de novo synthese: Aangezien de promotors relatief korte sequenties zijn, kunnen ze worden geordend als twee enkelstrengs overlappende oligo’s worden geannealed en verlengd om de volledige promotors te construeren. Zie dit OpenWetWare protocol voor het construeren van onderdelen via oligo annealing en extension. Als alternatief kunnen de promotors als korte genen worden besteld bij een bedrijf als Geneart.
Via het Register distributie: Sommige van de promotors zijn beschikbaar in de huidige distributie van het register, zie de kolom beschikbaarheid in de tabel hieronder.
Ontwerp & Constructie
Het sequentielogo voor de sterke promotors van het bacteriofaag T7-genoom.
De T7-promotors in de collectie zijn door verschillende groepen ontworpen en geconstrueerd. Er is echter alleen T7 RNAP en dus maar één soort T7-promoter. De consensussequentie voor T7-promotors kan worden afgeleid uit het sequentielogo voor T7-promotors dat hiernaast is afgebeeld.
T7-promoterverzameling
| Naam | Beschrijving | Promoter-sequentie | Positieve Regulatoren |
Negatieve Regulatoren |
Lengte | Doc | Status |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| BBa_I712074 | T7 promoter (sterke promoter van T7 bacteriofaag) | . . . agggaatacaagctacttgttctttttgca | 46 | 1938 | In voorraad | ||
| BBa_I719005 | T7 Promotor | taatacgactcactatagggaga | 23 | 7912 | In voorraad | ||
| BBa_J34814 | T7 Promotor | gaatttaatacgactcactatagggaga | 28 | 1190 | Niet in voorraad | ||
| BBa_J64997 | T7 consensus -10 en rest | taatacgactcactatagg | 10154 | Het is ingewikkeld | |||
| BBa_K113010 | overlappende T7-promoter | . . gagtcgtattaatacgactcactatagggg | 40 | 1553 | Het is ingewikkeld | ||
| BBa_K113011 | meer overlappende T7-promotor | . . . . agtgagtcgtactacgactcactatagggg | 37 | 1601 | Het is ingewikkeld | ||
| BBa_K113012 | verzwakt overlappende T7-promotor | . . . gagtcgtattaatacgactctctatagggg | 40 | 1630 | Het is ingewikkeld | ||
| BBa_K1614000 | T7-promoter voor expressie van functioneel RNA | taatacgactcactatag | 18 | 5219 | In voorraad | ||
| BBa_K3511008 | C62-T7 promotor | taatacgactcacaatcgcggag | 23 | ||||
| BBa_K3633015 | T7 promotor | taatacgactcactatagg | 19 | Het is ingewikkeld | |||
| BBa_K525998 | Promoter T7 en RBS | . . . atacgactcactatagggaaagaggagaaa | 32 | 3036 | Op voorraad | ||
| BBa_R0085 | T7 Consensus Promoter Sequence | taatacgactcactatagggaga | 23 | 2072 | In voorraad | ||
| BBa_R0180 | T7 RNAP promoter | ttatacgactcactatagggaga | 23 | 1654 | Niet in voorraad | ||
| BBa_R0181 | T7 RNAP-promotor | gaatacgactcactatagggaga | 23 | 1651 | Niet in voorraad | ||
| BBa_R0182 | T7 RNAP promoter | taatacgtctcactatagggaga | 23 | 1653 | Niet op voorraad | ||
| BBa_R0183 | T7 RNAP promoter | tcatacgactcactatagggaga | 23 | 1653 | Niet in voorraad | ||
| BBa_R0184 | T7 promoter (lacI repressible) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1176 | Niet in voorraad | ||
| BBa_R0185 | T7 promoter (lacI repressible) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1888 | Niet in voorraad | ||
| BBa_R0186 | T7 promoter (lacI repressible) | . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Niet in voorraad | ||
| BBa_R0187 | T7 promoter (lacI repressible) | . . ataggggaattgtgagcggataacaattcc | 44 | 1885 | Niet in voorraad | ||
| BBa_Z0251 | T7 sterke promotor | . . taatacgactcactatagggagaccacaac | 35 | 1887 | Niet in voorraad | ||
| BBa_Z0252 | T7 zwakke binding en verwerkelijking | . taattgaactcactaaagggagaccacagc | 35 | 1667 | Niet in voorraad | ||
| BBa_Z0253 | T7 zwak bindende promotor | . . cgaagtaatacgactcactattagggaaga | 35 | 1400 | Niet in voorraad |