Periodic acid-Schiff (PAS) is een andere vaak gebruikte speciale kleuring in het histologielab.
Wat kleurt PAS?
(1) Polysacchariden: De techniek wordt gewoonlijk gebruikt om polysacchariden te identificeren- deze macromoleculen zijn samengesteld uit monosaccharide eenheden verbonden door covalente bindingen. De belangrijkste polysaccharide die via histologische kleuring in menselijke en dierlijke weefselcoupes wordt geïdentificeerd is glycogeen. Dit is aanwezig in talrijke weefsels, waaronder skeletspieren, hartspieren, lever en nieren.
(2) Neutrale slijmstoffen: Het wordt ook vaak gebruikt om neutrale mucusstoffen te kleuren en te identificeren. Deze kunnen glycoproteïnen, glycolipiden, en neutrale mucinen omvatten, die worden geproduceerd door epitheelcellen in verschillende organen.
(3) Weefselkeldermembranen: Deze PAS-positieve dunne lagen van reticulair bindweefsel verankeren en ondersteunen epitheel en endotheel aan onderliggend bindweefsel.
(4) Schimmelorganismen: De celwanden van sommige schimmelorganismen bevatten veel koolhydraten, en kleuren ook PAS-positief. Dit werkt echter alleen op levende schimmels.
Algemene principes van de vlek
De reactiviteit van de PAS-techniek is gebaseerd op de structuur van de monosacharide-eenheden.
Bij de eerste reactie in de vlek treedt een periodiek zuur op als een oxidatiemiddel om de koolstof-koolstofbindingen tussen twee aangrenzende hydroxylgroepen te oxideren. Hierdoor ontstaan Schiff-reactieve aldehydegroepen.
In de tweede reactie reageert het weefselgedeelte met Schiff-reagens. Dit bestaat uit een mengsel van basische fuchsine, zoutzuur, en natriummetabisulfiet. De basische fuchsine in het mengsel reageert met nieuw gevormde aldehydegroepen in het weefsel om een heldere magenta kleur te produceren.
Ten slotte, wanneer de doorsnede in water wordt gespoeld, produceren de gebonden fuchsinemoleculen in het weefsel een heldere magenta kleur. De intensiteit van de kleur is evenredig met de concentratie hydroxylgroepen die oorspronkelijk in de monosaccharide-eenheden aanwezig waren.
Haematoxyline wordt dan typisch gebruikt als tegenkleuring om andere weefselelementen zichtbaar te maken. Wanneer PAS wordt gebruikt om schimmelorganismen aan te tonen, wordt echter de voorkeur gegeven aan een lichtgroene tegenkleuring.
Diastase (alfa-amylase) digestie kan ook worden gebruikt om te helpen bij de diagnose van glycogeenopslagziekten. Diastase hydrolyseert zetmeel, glycogeen, en afbraakproducten afkomstig van deze weefselpolysachariden. In vergelijking met een objectglaasje van weefsel dat glycogeen bevat, zal een diastase-extractglaasje geen zichtbare PAS-kleuring vertonen.
| Histologisch kenmerk | Kleur met PAS-beits |
| Glycogeen, keldermembranen, slijmstoffen, schimmelorganismen | Magenta |
| Nuclei | Blauw (met hematoxyline tegenkleuring) |
| Andere weefselelementen | Groen (met lichtgroene tegenkleuring) |
Wie gebruikt PAS Stain?
Deze vlek wordt veel gebruikt voor zowel diagnostische als onderzoeksdoeleinden. Onderzoekers die bijvoorbeeld glycogeenopslagziekten of ziekten van het basaalmembraan bestuderen, kunnen routinematig met PAS gekleurde weefseldelen onderzoeken om deze respectieve elementen in interessante weefsels te evalueren.
In diagnostische laboratoria gebruiken pathologen deze kleuring vaak om vragen te helpen beantwoorden die kunnen rijzen na het onderzoek van routinematig met hematoxyline en eosine gekleurde coupes. In het bijzonder kan het worden gebruikt om te helpen bij de diagnose van:
- Glycogeen opslag ziekten: Dit zijn aandoeningen waarbij buitensporige hoeveelheden glycogeen worden opgeslagen in de lever, de spieren of de nieren. PAS wordt in de kliniek vaak routinematig gebruikt om glycogeenophoping in biopten van deze weefsels aan te tonen.
- Tumoren: Glycogeenkorrels kunnen ook aanwezig zijn in sommige tumoren, waaronder sommige die ontstaan in weefsels zoals de alvleesklier, longen en blaas.
- Schimmelinfectie: PAS kan worden gebruikt om sommige schimmelorganismen in weefselsecties zichtbaar te maken.
- Basismembranen: Aangezien PAS kan worden gebruikt om de keldermembranen van weefsels te markeren, kan het worden gebruikt om aandoeningen te identificeren waarbij sprake is van zwakte of het niet goed functioneren van de keldermembranen – zoals in het geval van sommige glomerulaire ziekten in de nieren.
Waar wordt PAS het meest voor gebruikt in uw laboratorium?
Heeft dit u geholpen? Deel het dan met uw netwerk.