Etapa a doua: Prelucrarea țesutului
După ce donatorul a trecut prin procesul de screening, se parcurg mai mulți pași pentru a asigura o prelucrare standardizată a țesutului alogrefă. Toate țesuturile sunt procesate cu tehnici „aseptice”, care încorporează tehnici standard de sală de operație. Atunci când țesuturile sunt obținute de la donator, termenul de recoltare a fost înlocuit respectuos cu cel de recuperare. Există limite de timp pentru ca țesuturile să fie recuperate. Se stabilește o fereastră de 24 de ore în care țesuturile corporale trebuie să fie recuperate conform standardelor AATB.
Recuperarea se face cel mai adesea într-o sală de operație sau într-un centru de recuperare desemnat. Ocazional, aceasta se poate face într-o morgă. O echipă de tehnicieni asistă la această procedură chirurgicală. Tehnicile din sala de operație, inclusiv pregătirea și învelirea donatorului, sunt similare celor din protocoalele operatorii standard. Se utilizează o tehnică sterilă cu draperii, halate, mănuși și instrumente sterile. Fiecare țesut este procurat, cultivat, împachetat, etichetat, sigilat și expediat în containere dedicate, la temperaturi de congelare. Majoritatea acestor țesuturi sunt recuperate cu ajutorul acestei tehnici aseptice de recuperare a țesuturilor. Contaminarea poate apărea în timpul acestui proces sau în timpul transferului în containere înainte de a ajunge la banca de țesuturi. Această tehnică aseptică nu ar trebui să fie considerată un proces steril. S-a documentat că contaminarea provine din tractul gastro-intestinal sau respirator al donatorului (contaminare agonală).10,12 Focare recente au documentat această contaminare după deces, cu defectarea sistemului gastro-intestinal, precum și recuperarea după asistolă la ore târzii, în afara standardelor băncilor de țesuturi.23
Băncile de țesuturi examinează încărcătura biologică a suprafeței țesutului și a lichidului tisular însoțitor al țesuturilor primite. Bioburden este definit ca fiind numărul de organisme contaminate găsite într-o anumită cantitate de material înainte de a fi supus unei proceduri de sterilizare. Țesutul alogrefă are o suprafață fizică complexă, cu fisuri și crăpături care fac dificilă îndepărtarea tuturor agenților patogeni potențiali. Culturile cu tampoane de suprafață sunt documentate ca fiind sensibile doar în proporție de 70 % până la 92 %.26 Convenția farmacopeică americană18 , standardul industriei medicale pentru testele de sterilitate și alte proceduri de control al calității, a declarat că culturile cu tampoane nu ar trebui să fie utilizate ca dovadă definitivă a sterilizării. Culturile ar trebui să fie folosite pentru a monitoriza procesele de sterilizare validate anterior. Unele bănci de țesuturi vor respinge țesuturile dacă există o cantitate mare de încărcătură biologică atunci când primesc inițial țesutul.
Când procesează țesuturi, băncile de țesuturi se străduiesc să curețe și să sterilizeze țesuturile pentru transplant. Sterilizarea este definită ca un proces care ucide toate formele de viață, în special microorganismele. Sterilitatea a fost exprimată ca o probabilitate matematică de risc. FDA a stabilit un nivel de asigurare a sterilității (SAL) 10-3 ca fiind adecvat pentru dispozitivele medicale biologice implantabile. Aceasta înseamnă că există o șansă (probabilitate) de 1 la 1000 ca un microb viabil viu să existe în sau pe dispozitivul implantabil. Alogrefele musculo-scheletice convenționale sunt clasificate în mod obișnuit ca HCT/P de către FDA/Center for Biologics Evaluation in Research (CBER). Association for the Advancement of Medical Instrumentation (AAMI)4 afirmă că un SAL de 10-6 este adecvat pentru dispozitivele medicale. În prezent, AATB solicită un SAL de 10-6 ca standard propriu, diferit de cel al FDA.3
Diferite tehnici de sterilizare și de procesare validate sunt utilizate în prezent de marile bănci de țesuturi din Statele Unite. Tehnici de procesare mai noi continuă să fie dezvoltate pentru a îmbunătăți siguranța țesuturilor. Cele mai multe procese de sterilizare se bazează pe tratarea țesuturilor „îmbogățite” cu diferiți agenți patogeni sau țesuturile sunt scoase la suprafață sau scufundate în fluide care conțin agenții patogeni de interes. Din punct de vedere biologic, acest lucru nu este același lucru cu un țesut care a fost infectat „sistemic”. Validitatea acestor tehnici de testare trebuie studiată în continuare.
FDA este organismul care guvernează în ultimă instanță industria băncilor de țesuturi, dar nu precizează în mod specific ce tehnică de procesare a sterilizării este cea mai bună sau care ar trebui folosită. În cadrul normelor recente pentru GTP, FDA cere ca orice unitate de bănci de țesuturi care face o declarație scrisă privind sterilitatea alogrefelor cu etichetarea lor să fie supusă unor inspecții surpriză și revizuirii de către FDA.19,22 Fiecare bancă de țesuturi trebuie să aibă date validate pentru declarațiile lor de sterilitate prin metoda lor individuală de procesare a țesuturilor. Cele mai multe bănci de țesuturi utilizează o formulă proprie de diferiți detergenți biologici, alcool, antibiotice și peroxid de hidrogen.
Tabelul 9-1 enumeră exemple de câteva dintre cele mai importante procese ale băncilor de țesuturi, inclusiv formule precum Allowash XG de la Lifenet, care utilizează o tehnică de spălare și etape intensive de decontaminare cu alcool, antibiotice și peroxid de hidrogen. Procesul de țesut BioCleanse de la Regeneration Technologies, Inc. (RTI), utilizează un proces automatizat cu vacuum-presiune și temperatură scăzută cu peroxid de hidrogen și alcool. Fundația pentru transplanturi musculo-scheletice (Musculoskeletal Transplantation Foundation – MTF) utilizează un proces de purificare a țesuturilor pentru alogrefă (ATP), un proces cu detergent neconic, peroxid de hidrogen și alcool cu un cocktail de antibiotice. Tissue Bank International (TBI) dispune de TranZgraft, un proces de sterilizare brevetat utilizat la temperaturi scăzute. Allosource utilizează Validated Sterilizer ca proces de dezinfecție. Aceste bănci de țesuturi au validat procesele lor individuale de sterilizare brevetate la un nivel SAL de 10-6
Care metodă de procesare a țesuturilor ar trebui să fie eficientă pentru inactivarea virusurilor și uciderea bacteriilor. Aceasta ar trebui să pătrundă în mod eficient în țesut și să fie îndepărtată în siguranță din țesut, păstrând în același timp proprietățile mecanice și biologice ale țesutului.
Nicio tehnică dovedită nu este mai eficientă în procesarea sau sterilizarea țesutului alogrefă pentru uz uman. Sunt necesare studii pe termen lung pentru a evalua diferitele tehnici de procesare în timp. Nu toate alogrefele musculo-scheletice de țesut moale pot fi sterilizate în siguranță. Condrocitele din alogrefăurile de cartilaj articular pot fi iremediabil afectate de diferite tehnici de procesare.
Radiațiile gamma sunt un agent de sterilizare foarte eficient care generează radicali liberi, care pot afecta negativ structura colagenului. Dozele mai mari de radiații au fost documentate ca fiind dăunătoare pentru țesut, iar în acest moment, radiațiile cu doze mici sunt utilizate în mod obișnuit de băncile de țesuturi pentru a elimina contaminanții de suprafață.6,9
Câteva bănci de țesuturi utilizează un proces de liofilizare (liofilizare). Acest lucru permite ca țesutul alogrefă să fie depozitat la temperatura camerei într-un ambalaj sigilat. Acest proces de liofilizare îngheață țesutul, iar conținutul de apă este redus la mai puțin de 6% din greutatea sa inițială. Acest lucru se realizează printr-un proces primar de uscare numit sublimare, care este urmat de un proces secundar de uscare numit desorbție. Această reducere a conținutului de apă nu susține nicio activitate biologică sau reacție chimică în țesut. În general, alogrefele liofilizate nu sunt utilizate în mod obișnuit pentru aplicații în medicina sportivă în Statele Unite. Ele sunt utilizate pe scară largă pentru proceduri de reconstrucție non-ortopedică în domeniile neurochirurgical și urologic.
.