Co je to antiidiotypová protilátka?

Jak je znázorněno na obrázku 1, antiidiotypová (Anti-ID) protilátka se váže na idiotyp jiné protilátky, obvykle protilátky lékové. Idiotyp lze definovat jako specifickou kombinaci idiotopů přítomných v oblastech určujících komplement (CDR) protilátky. Jednotlivý idiotop je specifická oblast v oblasti Fv protilátky, která se váže na paratop (vazebné místo antigenního epitopu) jiné protilátky. Proto lze idiotop považovat téměř za synonymum antigenního determinantu protilátky.

Obrázek 1: Protilátkové léčivo zaměřené na idiotyp protilátky. Struktura protilátky proti idiotypu. (A) Paratop protilátkového léčiva se naváže na epitop cílového antigenu v oblasti CDR protilátkového léčiva. (B) Paratop anti-ID se bude vázat na idiotop cílového protilátkového léčiva. Idiotop se nachází v oblasti CDR protilátkového léčiva a může být vedle vazebného místa antigenu protilátkového léčiva, může být s ním totožný nebo může být od něj vzdálený.

Typy protilátek proti idiotypu

Existují tři hlavní klasifikace protilátek proti idiotypu založené na detekci, jak je znázorněno na obrázku č. 2. První je antigen blokující anti-ID protilátka, pojmenovaná tak proto, že se paratop a idiotop cílových protilátek navzájem překrývají. Z tohoto důvodu si cílový antigen protilátky proti léčivu a protilátka anti-ID budou navzájem konkurovat. Proto tato forma anti-ID protilátky detekuje pouze volnou protilátku léku. Druhá klasifikace anti-ID protilátek se nazývá neblokující, protože paratop a idiotop protilátky se nepřekrývají. Proto se protilátka anti-ID a antigen mohou současně vázat na protilátkové léčivo, aniž by si navzájem ovlivňovaly vazebnou schopnost. Z tohoto důvodu se neblokující anti-ID protilátky používají k detekci všech forem dostupných protilátkových léčiv (volných nebo vázaných na antigen). Třetí klasifikací anti-ID protilátek jsou komplexní specifické anti-ID. Je tomu tak proto, že protilátka anti-ID se nemůže vázat na protilátkové léčivo, pokud toto léčivo již není navázáno na svůj antigen. Proto je tento typ anti-ID protilátek schopen detekovat pouze vázané protilátkové léčivo.

Obrázek 2. Typy protilátek proti idiotypu. (A) Anti-ID blokující antigen se vážou přímo na vazebné místo antigenu léčiva a přímo konkurují cílovému antigenu. (B) Idiotyp, na který se neblokující anti-ID také vážou, se vůbec nepřekrývá s paratopem protilátkového léčiva, což umožňuje protilátkovému léčivu vázat cílový antigen a anti-ID současně. (c) Komplexní specifické anti-ID se budou vázat na idiotop protilátkového léčiva pouze tehdy, když je toto léčivo již navázáno na svůj příslušný antigen.

Použití protilátek proti idotopu

Farmakokinetické testy

Protože většina protilátek proti idotopu je generována proti specifickému léčivu, běžně se používají v předklinické praxi pro farmakokinetickou analýzu (PK). PK je studium metabolismu léčiv v celém těle. Konkrétně kliničtí lékaři určí rychlost absorpce, distribuce, biologické dostupnosti a vylučování léčiva u různých kohort pacientů. Aby toho mohli výzkumníci dosáhnout, musí být schopni sledovat protilátky léčiv, které jsou navázány nebo nenavázány na určený cíl v různých časových bodech po podání. Pomocí antiID, především mAb, lze snadno sledovat a kvantifikovat různé formy protilátkových terapeutik v séru, krvi, moči nebo jiných tělesných tekutinách pacientů. Příklady farmakokinetických testů (formát ELISA) s použitím anti-IDs jsou uvedeny na obrázku 3.

Obrázek 3. Typy PK testů na bázi ELISA. Existují 4 běžné způsoby provedení PK testu na bázi ELISA. (1) Test zachycení antigenu zahrnuje destičku potaženou antigenem, na kterou se hlasitě váže volná protilátka léčiva. Značená protilátka proti léčivu se poté promyje, naváže a vizualizuje. Podobný vizualizační protokol se používá pro ostatní tři typy PK testů. (2) Test přemostění antiID zahrnuje destičku potaženou antiID, která se promyje volným protilátkovým léčivem a následně označeným antiID. (3) Sendvičový test zachycení anti-ID zahrnuje destičku potaženou anti-ID, která se promyje značeným IgG proti konstantní oblasti. (4) AntiID antigen-bridging assay spočívá v tom, že se anti-ID potažená destička promyje protilátkovým léčivem navázaným na značený antigen.

Testy imunogenicity

Polyklonální anti-ID se běžně používají pro testy imunogenicity jako referenční kontroly. Imunogenicita je schopnost léčiva, například protilátkového léčiva, vyvolat humorální a/nebo buněčnou imunitní odpověď, která vede k tvorbě protilátek proti léčivu (ADA). ADA vedou k negaci všech účinků souvisejících s protilátkovým léčivem a v podstatě zcela potlačují terapeutický aspekt léčiva. proto je pro výzkumné pracovníky nesmírně důležité analyzovat imunogenicitu nového protilátkového léčiva během preklinické analýzy. ADA je velmi podobná anti-IDs, protože obě se vážou na stejný protilátkový lék, proto lze při analýze přítomnosti ADAs ve vzorcích pacientů použít jako pozitivní kontrolu pool polyklonálních anti-IDs. Příklad testu imunogenicity založeného na ELISA s použitím anti-ID jako pozitivní kontroly je uveden na obrázku 4.

Obrázek 4. Typy testů imunogenicity. (A) Pokud protilátkové léčivo indukuje vznik ADA, lze ADA vizualizovat pomocí přímého vazebného testu ELISA. Při tomto testu se destička potažená protilátkovým léčivem promyje sérem. Destička se poté promyje značeným IgG, který se váže pouze na konstantní oblast ADA. ELISA proto fluoreskuje pouze v případě, že jsou ve vzorku séra přítomny ADA. (B) Přemosťovací test ELISA je takový, kdy se destička potažená protilátkou proti léčivu vystaví působení séra obsahujícího ADA, které se váže na jednu oblast ScFv protilátky proti léčivu. Zbývající oblast ScFv ADA se naváže na značenou verzi stejného protilátkového léčiva. Oba tyto testy je třeba analyzovat prostřednictvím pozitivní kontroly, jako jsou anti-ID.

Balíčky pro generování protilátek proti idiotypu od společnosti GenScripts

GenScript nyní nabízí odlišné balíčky pro generování anti-ID, které jsou specifické pro následnou aplikaci, hostitelský druh a klonalitu podle vašeho výběru. Balíčky společnosti GenScript pro generování anti-ID zahrnují….

Rodent mAb: Imunizace myší nebo potkanů vaším protilátkovým lékem pro vývoj silných anti-ID protilátek generovaných již za 3 měsíce za perfektní cenu! Dodávky zahrnují stabilní hybridomové buněčné linie, purifikované mAb a plně komplexní zprávu COA analyzující typ blokování a testování specifičnosti.

Králičí mAb: Anti-ID protilátky vytvořené pomocí platformy GenScripts MonoRabTM se vážou s nejvyšší specificitou a citlivostí na trhu. Po vlastní analýze supernatantu rodičovského klonu procházejí pozitivní klony sekvenováním oblasti V, což umožňuje optimální rekombinantní expresi vybrané mAb. Tento balíček zahrnuje také garantované dodání druhého páru anti-ID mAb konjugovaných s biotinem, který umožňuje snadné vytvoření sendvičové analýzy PK založené na ELISA.

Králičí pAb: Králičí pAbs od společnosti GenScript poskytují výhodnou dobu dodání a cenové rozpětí pro zákazníky, kteří mají zájem o použití polyklonálních anti-ID pro analýzu imunogenity. Díky našemu protokolu expresního generování protilátek a rozsáhlému procesu purifikace a screeningu jsou králičí anti-ID pAb společnosti GenScript spolehlivou volbou pro váš příští projekt.

Klikněte sem a seznamte se s hotovými produkty antiidiotypových protilátek proti lékovým trhákům.

.