Mi az anti-Idiotípusos antitest?

Az 1. ábrán látható módon az anti-idiotípusos (Anti-ID) antitest egy másik antitest, általában egy antitest hatóanyag idiotípusához kötődik. Az idiotípus az antitest komplement meghatározó régióiban (CDR) található idiotópok specifikus kombinációjaként definiálható. Egyetlen idiotóp egy specifikus régió az antitest Fv régióján belül, amely egy másik antitest paratópjához (antigén epitóp kötőhelyéhez) kötődik. Ezért az idiotóp szinte szinonimának tekinthető az antitest antigéndeterminánsával.

1. ábra. Az anti-idiotípusú antitest szerkezete. (A) Az antitest hatóanyag paratópja az antitest hatóanyag CDR régiójában lévő célantigén epitópjához kötődik. (B) Az anti-ID paratópja a célzott antitest hatóanyagának idiotópjához kötődik. Az idiotóp az antitest hatóanyag CDR-régióján belül van, és lehet az antitest hatóanyag antigénkötőhelye mellett, azzal azonos vagy attól távol.

Az anti-idotípus antitestek típusai

A kimutatáson alapuló anti-ID antitestek három fő osztályozása a 2. ábrán látható. Az első az antigénblokkoló anti-ID antitest, amely azért kapta ezt a nevet, mert a célzott antitestek paratópja és idiotópja átfedésben van egymással. Emiatt az antitest hatóanyag célantigénje és az anti-ID antitest versenyezni fog egymással. Ezért az anti-ID antitestnek ez a formája csak a szabad antitest hatóanyagot fogja kimutatni. Az anti-ID antitestek második osztályozását nem blokkolónak nevezik, mivel az antitest hatóanyag paratópja és idiotópja nem fedik egymást. Ezért az anti-ID antitest és az antigén egyszerre tud kötődni az antitest hatóanyaghoz anélkül, hogy befolyásolnák egymás kötődési képességét. Emiatt a nem blokkoló anti-ID antitesteket a rendelkezésre álló antitest hatóanyag minden (szabad vagy antigénhez kötött) formájának kimutatására használják. Az anti-ID antitestek harmadik osztályozása a komplex specifikus anti-ID. Ennek az az oka, hogy az anti-ID antitest csak akkor tud kötődni az antitest hatóanyaghoz, ha a hatóanyag már kötődik az antigénjéhez. Ezért ez a fajta anti-ID antitest csak a kötött antitest hatóanyagot képes kimutatni.

2. ábra. Az anti-idiotípusos antitestek típusai. (A) Az antigénblokkoló anti-ID-k közvetlenül az antitest hatóanyag antigénkötő helyéhez kötődnek, közvetlenül versengve a célantigénnel. (B) Az idiotípus, amelyhez a nem blokkoló anti-ID-k is kötődnek, egyáltalán nem fedik át az antitest hatóanyag paratópját, lehetővé téve az antitest hatóanyag számára, hogy egyszerre kösse meg a célantigént és az anti-ID-t is. (c) A komplex specifikus anti-ID-k csak akkor kötődnek az antitest hatóanyag idiotópjához, ha az már kötődik a megfelelő antigénhez.

Az anti-idotípusú antitestek felhasználása

Farmakokinetikai vizsgálatok

Mivel a legtöbb anti-ID antitestet egy specifikus antitest hatóanyaggal szemben állítják elő, a preklinikai gyakorlatban gyakran használják őket farmakokinetikai (PK) vizsgálatokra. A PK a gyógyszer metabolizmusának tanulmányozása a szervezetben. Konkrétan a klinikusok a gyógyszerek felszívódásának, eloszlásának, biológiai hozzáférhetőségének és kiválasztásának sebességét határozzák meg a betegek különböző kohorszaiban. Ennek elérése érdekében a kutatóknak képesnek kell lenniük arra, hogy nyomon kövessék a kijelölt célpontjukhoz kötött vagy nem kötött antitest hatóanyagokat a beadás utáni különböző időpontokban. Az anti-ID-k, elsősorban a mAb-k alkalmazásával az antitestterápiák különböző formái könnyen nyomon követhetők és számszerűsíthetők a betegek szérumában, vérében, vizeletében vagy más testnedvekben. Az anti-ID-ket alkalmazó farmakokinetikai vizsgálatokra (ELISA formátum) a 3. ábra mutat példákat.

3. ábra. Az ELISA-alapú PK-vizsgálatok típusai. Az ELISA-alapú PK-vizsgálat elvégzésének 4 gyakori módja van. (1) Az antigénbefogási vizsgálat során egy antigénnel bevont lemezre kerül sor, amely hangosan megköti a szabad antitest hatóanyagot. A jelölt anti-ID-t ezután átmossuk az antitest-droggal, megkötjük és vizualizáljuk. Hasonló vizualizációs protokollt alkalmaznak a másik háromféle PK-próbánál is. (2) Az anti-ID áthidaló vizsgálat egy anti-ID-vel bevont lemezt foglal magában, amelyet átmosnak egy szabad antitest-droggal, majd egy jelölt anti-ID-vel. (3) Az anti-ID befogási szendvicsvizsgálat egy anti-ID-vel bevont lemezt foglal magában, amelyet egy jelölt anti-konstans régió IgG-vel mosnak át. (4) Az anti-ID antigén-hídképző assay az, amikor egy anti-ID-vel bevont lemezt egy jelölt antigénhez kötött antitest-droggal mossák.

Immunogenitási vizsgálatok

A poliklonális anti-ID-ket általában immunogenitási vizsgálatokhoz használják referenciakontrollként. Az immunogenitás egy terápiás szer, például egy antitest hatóanyag azon képessége, hogy humorális és/vagy sejtközvetített immunválaszt indukáljon, amely gyógyszerellenes antitestek (ADA-k) kialakulásához vezet. Az ADA-k az antitest gyógyszerrel kapcsolatos összes hatás negligálásához vezetnek, lényegében teljesen gátolva a gyógyszer terápiás aspektusát.Ezért rendkívül fontos, hogy a kutatók a preklinikai elemzés során elemezzék egy új antitest gyógyszer immunogenitását. Az ADA nagyon hasonlít az anti-ID-hez, mivel mindkettő ugyanahhoz az antitest hatóanyaghoz kötődik, ezért a poliklonális anti-ID-ek poolja pozitív kontrollként használható, amikor az ADA-k jelenlétét elemzik a betegmintákban. A 4. ábra egy ELISA-alapú immunogenitási vizsgálat példáját mutatja be egy anti-ID-t pozitív kontrollként használva.

4. ábra. Az immunogenitási vizsgálatok típusai. (A) Ha egy antitest hatóanyag ADA-k kialakulását indukálja, az ADA-k közvetlen kötődésű ELISA-val vizualizálhatók. Ebben a vizsgálatban az antitest hatóanyaggal bevont lemezt szérummal mossuk. Ezután a lemezt olyan jelölt IgG-vel mossuk, amely csak az ADA-k állandó régiójához kötődik. Ezért az ELISA csak akkor fluoreszkál, ha a mintaszérumban ADA-k vannak jelen. (B) Az áthidaló ELISA vizsgálat az, amikor az antitest hatóanyaggal bevont lemezre ADA-t tartalmazó szérum kerül, amely az antitest hatóanyag egyik ScFv régiójához kötődik. A fennmaradó ADA ScFv régió ugyanannak az antitest hatóanyagnak egy jelölt változatához kötődik. Mindkét vizsgálatot egy pozitív kontrollon, például anti-ID-ken keresztül kell elemezni.

GenScripts Anti-Idiotype Antibody Generation Packages

AGenScript mostantól különböző anti-ID generáló csomagokat kínál, amelyek specifikusak az Ön által választott downstream alkalmazáshoz, gazdafajhoz és klonalitáshoz. A GenScript anti-ID generáló csomagjai közé tartozik….

Rodent mAb: Immunizáljon egereket vagy patkányokat az Ön antitest hatóanyagával, hogy erős anti-ID antitesteket fejlesszen ki, amelyeket akár 3 hónap alatt generáljon tökéletes áron! A szállított termékek közé tartoznak a stabil hibridoma sejtvonalak, a tisztított mAb, valamint egy teljesen átfogó COA jelentés, amely elemzi a blokkolás típusát és a specificitási vizsgálatot.

Kullancs mAb: A GenScripts MonoRabTM platform segítségével előállított anti-ID antitestek a piacon elérhető legmagasabb specificitással és érzékenységgel kötődnek. A házon belüli szülői klónok felülúszó elemzését követően a pozitív klónok V régió szekvenáláson mennek keresztül, lehetővé téve az Ön által kiválasztott mAb optimális rekombináns expresszióját. Ez a csomag egy második biotin konjugált anti-ID mAb pár garantált szállítását is tartalmazza, amely lehetővé teszi a szendvics ELISA alapú PK analízis egyszerű létrehozását.

Rabbit pAb: A GenScript nyúl pAbs-ai kényelmes átfutási időt és árkategóriát biztosítanak azon ügyfelek számára, akik poliklonális anti-ID-ket szeretnének használni immunogenitás-elemzéshez. A GenScript nyúl anti-ID pAb-k expressz antitest-előállítási protokollunk és kiterjedt tisztítási és szűrési folyamatunk segítségével megbízható lehetőséget jelentenek a következő projektjéhez.

Kattintson ide, hogy megismerje a kész anti-idiotípusú antitest termékeket blockbuster gyógyszerek ellen.

Miért?