Jurkatovy buňky byly vytvořeny koncem 70. let 20. století z periferní krve mladého chlapce s T-buněčnou leukémií a představují imortalizovanou buněčnou linii T-lymfocytů. Byly použity ke studiu T-buněčné leukémie, signalizace T-buněk a citlivosti nádorových buněk na léčbu léky. Tyto malé kulaté buňky snadno rostou v suspenzi a byly také použity jako modelový systém pro různé testy životaschopnosti buněk a apoptózy, jak je ukázáno zde.
Podívejte se na webinář o detekci buněk bez skvrn
Stáhněte si aplikační poznámku k detekci buněk bez skvrn
无荧光染料的非标记细胞成像分析技术 >>
Stáhněte si elektronickou knihu: Počítání buněk jako profesionál
Obrázek 1: Počítání buněk StainFree
Buňky Jurkat byly zobrazeny pomocí zobrazovacího cytometru SpectraMax MiniMax 300 a buňky byly identifikovány pomocí předdefinovaného nastavení „CellsC“. Vlevo jsou zobrazeny původní snímky v procházejícím světle a vpravo tytéž snímky s fialovými maskami označujícími buňky identifikované softwarem. Jsou zobrazeny dvě hustoty buněk: 50 000 a 1562 buněk nasazených na jamku 96jamkové destičky.
Obr. 2: Počet buněk StainFree vs. počet buněk v jamce. počty fluorescenčních buněk
Buňky Jurkat nasazené v hustotě od 390 do 50 000 buněk na jamku byly počítány pomocí technologie StainFree (modré body) nebo byly obarveny barvivem EarlyTox™ Live Cell Assay a byly počítány zelené fluorescenční buňky (zelené body). Počty buněk získané oběma metodami se přesně shodovaly v celém rozsahu hustot buněk. Počty buněk byly měřeny pro čtyři zobrazená místa v každé jamce.
Obrázek 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Buňky Jurkat byly ošetřeny sériovými ředěními staurosporinu (červená plocha), kamptotecinu (zelená plocha) a etoposidu (modrá plocha) po dobu 24 hodin a poté testovány pomocí sady Molecular Devices EarlyTox Live/Dead Assay Kit. Živé buňky byly obarveny kalceinem AM (zelené barvivo) a mrtvé buňky byly obarveny homodimerem ethidia (červené barvivo) a odečteny na vícerežimové mikrodestičkové čtečce SpectraMax i3x pomocí funkce WellScan, která provádí vícenásobné čtení pravidelně rozmístěné po jamce. Výsledky byly vyneseny do grafu jako poměr zelené/červené barvy v závislosti na koncentraci sloučeniny. Všechny sloučeniny použité v tomto experimentu způsobily dramatické snížení životaschopnosti buněk během 24 hodin.
Obrázek 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Buňky Jurkat byly ošetřeny staurosporinem (červený graf), kamptothecinem (zelený graf) nebo etoposidem (modrý graf) po dobu 28 hodin a poté testovány na apoptózu pomocí soupravy EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit. Buňky exprimující kaspázu-3/7 byly obarveny zeleně fluorescenčně a byly zobrazeny a spočítány pomocí zobrazovacího cytometru SpectraMax MiniMax 300.
Tip:
Díky své zaoblené morfologii a jednotné velikosti se buňky Jurkat poměrně snadno zobrazují a počítají. Pro počítání buněk StainFree skvěle funguje předdefinovaná funkce „CellsC“ v softwaru SoftMax Pro.
Sada nástrojů pro analýzu buněk Jurkat
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parametry | Nastavení pro počty buněk | |
| Optická konfigurace | SpectraMax. MiniMax 300 zobrazovací cytometr | |
| Režim čtení | Zobrazování | |
| Typ čtení | Koncový bod | |
| Nastavení vlnové délky | Přenášené světlo | |
| Nastavení pořízení snímku | Expozice: Nastavení analýzy snímků | Typ analýzy: 7 ms |
| Nastavení analýzy snímků | Typ analýzy: Délka vlny pro vyhledání objektů: Analýza diskrétních objektů Délka vlny pro vyhledání objektů: O technologii bezbarvé detekce buněk Zobrazování buněčných testů obvykle vyžaduje použití fluorescenčních sond, které mohou být toxické pro živé buňky nebo mohou fungovat pouze ve fixovaných buňkách. Bezznačková metoda analýzy počtu buněk a jejich konfluence umožňuje výzkumníkům kvantitativně sledovat proliferaci a zdraví buněk bez časově náročných pracovních postupů, které mohou narušit jejich životaschopnost. Multirežimová mikrodestičková platforma SpectraMax i3 se zobrazovacím cytometrem MiniMax 300 využívá jedinečnou patentovanou technologii detekce buněk StainFree, která umožňuje provádět testy buněčné proliferace, cytotoxicity a další testy bez jaderných barviv, jako je DAPI, které interkaluje s DNA, nebo barviv pro živé buňky, která jsou ve skutečnosti pro buňky dlouhodobě toxická. |