Înființate la sfârșitul anilor 1970 din sângele periferic al unui tânăr băiat cu leucemie cu celule T, celulele Jurkat sunt o linie celulară imortalizată de limfocite T. Acestea au fost utilizate pentru a studia leucemia cu celule T, semnalizarea celulelor T și sensibilitatea celulelor canceroase la tratamentele medicamentoase. Aceste celule mici și rotunde cresc ușor în suspensie și au fost, de asemenea, utilizate ca sistem model pentru diverse teste de viabilitate celulară și apoptoză, după cum se demonstrează aici.
Vezi webinarul StainFree Cell Detection
Download StainFree Cell Detection Application Note
无荧光染料的非标记细胞成像分析技术 >>
Download eBook: Count Cells Like a Pro
Figura 1: Numărătoarea de celule StainFree
Celulele Jurkat au fost imaginate cu ajutorul citometrului de imagistică SpectraMax MiniMax 300, iar celulele au fost identificate cu ajutorul setării predefinite „CellsC”. În stânga sunt prezentate imaginile originale cu lumină transmisă, iar în dreapta sunt aceleași imagini cu măști mov care indică celulele identificate de software. Sunt prezentate două densități de celule: 50.000 și 1562 de celule însămânțate per puț al unei plăci cu 96 de puțuri.
Figura 2: Numărul de celule StainFree vs. numărul de celule de la StainFree. numărarea celulelor fluorescente
Celele Jurkat însămânțate la densități cuprinse între 390 și 50.000 de celule pe puț au fost numărate cu ajutorul tehnologiei StainFree (puncte albastre), sau au fost colorate cu colorantul EarlyTox™ Live Cell Assay și au fost numărate celulele fluorescente verzi (puncte verzi). Numărătorile de celule obținute cu ambele metode au fost în strânsă concordanță pe întreaga gamă de densități celulare. Numerele de celule au fost măsurate pentru patru locații imaginate pe puț.
Figura 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Celele Jurkat au fost tratate cu diluții seriale de staurosporină (graficul roșu), camptotecină (graficul verde) și etoposidă (graficul albastru) timp de 24 de ore și apoi au fost analizate cu ajutorul kitului Molecular Devices EarlyTox Live/Dead Assay Kit. Celulele vii au fost colorate cu calceină AM (colorant verde), iar celulele moarte au fost colorate cu homodimer de etidiu (colorant roșu) și au fost citite pe un cititor de microplăci SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader, utilizând funcția WellScan, care efectuează citiri multiple distanțate în mod regulat de-a lungul godeului. Rezultatele au fost reprezentate grafic ca raport verde/roșu în funcție de concentrația compusului. Toți compușii utilizați în acest experiment au provocat o reducere drastică a viabilității celulare în decurs de 24 de ore.
Figura 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Celele Jurkat au fost tratate cu staurosporină (graficul roșu), camptotecină (graficul verde) sau etoposidă (graficul albastru) timp de 28 de ore și apoi au fost testate pentru apoptoză cu ajutorul kitului EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit. Celulele care exprimă caspaza-3/7 au fost colorate în verde fluorescent și au fost imaginate și numărate cu ajutorul citometrului de imagistică SpectraMax MiniMax 300.
Tip:
Grație morfologiei lor rotunjite și dimensiunii uniforme, celulele Jurkat sunt destul de ușor de imaginat și numărat. Pentru numărarea celulelor StainFree, funcția predefinită „CellsC” din SoftMax Pro Software funcționează foarte bine.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parametru | Setare pentru numărarea celulelor |
| Configurație optică | SpectraMax Citometru de imagistică MiniMax 300 |
| Mod de citire | Imagistică |
| Tip de citire | Endpoint |
| Setări lungime de undă | Lumină transmisă |
| Setări achiziție imagine | Expunere: 7 ms |
| Setări de analiză a imaginii | Tip de analiză: Analiza obiectelor discrete Lungime de undă pentru găsirea obiectelor: TL |
| Căutarea obiectelor | Setări: Setare predefinită ‘CellsC’ |
Despre tehnologia de detecție celulară StainFree Cell Detection Technology
Imagazinarea testelor bazate pe celule necesită de obicei utilizarea de sonde fluorescente care pot fi toxice pentru celulele vii sau care pot funcționa numai în celule fixate. O metodă fără etichete pentru analiza numărului de celule și a confluenței celulare permite cercetătorilor să monitorizeze cantitativ proliferarea și sănătatea celulelor fără fluxuri de lucru consumatoare de timp care pot perturba viabilitatea celulelor.
Platforma de microplăci multimodale SpectraMax i3 cu citometrul de imagistică MiniMax 300 utilizează tehnologia unică de detecție celulară StainFree Cell Detection Technology, în curs de brevetare, care vă permite să efectuați teste de proliferare celulară, citotoxicitate și alte teste fără coloranți nucleari precum DAPI, care se intercalează cu ADN-ul, sau coloranți pentru celule vii care sunt de fapt toxici pentru celule pe termen lung.
.