Stabilite alla fine degli anni ’70 dal sangue periferico di un ragazzo con leucemia a cellule T, le cellule Jurkat sono una linea cellulare di linfociti T immortalizzati. Sono state utilizzate per studiare la leucemia a cellule T, la segnalazione delle cellule T e la sensibilità delle cellule tumorali ai trattamenti farmacologici. Queste cellule piccole e rotonde crescono facilmente in sospensione e sono state anche utilizzate come sistema modello per vari saggi di vitalità e apoptosi cellulare, come dimostrato qui.
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Figura 1: StainFree cell counts
Le cellule Jurkat sono state fotografate utilizzando il citometro SpectraMax MiniMax 300 Imaging, e le cellule sono state identificate utilizzando l’impostazione predefinita ‘CellsC’. Mostrato a sinistra sono le immagini originali di luce trasmessa e sulla destra sono le stesse immagini con maschere viola che indicano le cellule identificate dal software. Sono mostrate due densità di cellule: 50.000 e 1562 cellule seminate per pozzetto di una piastra a 96 pozzetti.
Figura 2: Conteggio delle cellule StainFree vs. conta delle cellule fluorescenti
Le cellule Jurkat seminate a densità che vanno da 390 a 50.000 cellule per pozzetto sono state contate utilizzando la tecnologia StainFree (punti blu), oppure sono state colorate con il colorante EarlyTox™ Live Cell Assay e sono state contate le cellule fluorescenti verdi (punti verdi). I conteggi delle cellule ottenuti con entrambi i metodi hanno concordato strettamente sull’intera gamma di densità delle cellule. I conteggi delle cellule sono stati misurati per quattro siti ripresi per pozzetto.
Figura 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Le cellule Jurkat sono state trattate con diluizioni seriali di staurosporina (grafico rosso), camptothecin (grafico verde), ed etoposide (grafico blu) per 24 ore e poi analizzate usando il Molecular Devices EarlyTox Live/Dead Assay Kit. Le cellule vive sono state colorate con calceina AM (colorante verde), e le cellule morte sono state colorate con l’omodimero di etidio (colorante rosso) e lette su un lettore di micropiastre SpectraMax i3x Multi-Mode utilizzando la funzione WellScan, che esegue letture multiple spaziate regolarmente attraverso il pozzetto. I risultati sono stati tracciati come rapporto di verde/rosso contro la concentrazione del composto. Tutti i composti usati in questo esperimento hanno causato una drastica riduzione della vitalità cellulare entro 24 ore.
Figura 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Le cellule Jurkat sono state trattate con staurosporina (grafico rosso), camptothecin (grafico verde), o etoposide (grafico blu) per 28 ore e poi valutate per l’apoptosi utilizzando il kit EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay. Le cellule che esprimono la caspasi-3/7 sono state colorate di verde fluorescente e sono state fotografate e contate utilizzando il citometro SpectraMax MiniMax 300 Imaging.
Tip:
Grazie alla loro morfologia arrotondata e alle dimensioni uniformi, le cellule Jurkat sono abbastanza facili da visualizzare e contare. Per il conteggio delle cellule StainFree, il predefinito ‘CellsC’ nel software SoftMax Pro funziona benissimo.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- Citometro a immagini SpectraMax® MiniMax™ 300
- SoftMax® Pro Software
| Parametro | Impostazione della conta cellulare |
| Configurazione ottica | SpectraMax Citometro a immagini MiniMax 300 |
| Modalità di lettura | Immagini |
| Tipo di lettura | Endpoint |
| Impostazione lunghezza d’onda | Luce trasmessa |
| Impostazione acquisizione immagine | Esposizione: 7 ms |
| Impostazione di analisi dell’immagine | Tipo di analisi: Discrete Object Analysis Lunghezza d’onda per la ricerca di oggetti: TL |
| Trova oggetti | Impostazioni: impostazione predefinita ‘CellsC’ |
Informazioni sulla tecnologia StainFree Cell Detection
L’analisi delle cellule richiede tipicamente l’uso di sonde fluorescenti che possono essere tossiche per le cellule vive o possono funzionare solo in cellule fisse. Un metodo senza etichetta per analizzare il conteggio delle cellule e la confluenza delle cellule permette ai ricercatori di monitorare quantitativamente la proliferazione e la salute delle cellule senza flussi di lavoro che richiedono tempo e che possono interrompere la vitalità delle cellule.
La piattaforma per micropiastre multimodale SpectraMax i3 con il citometro a immagini MiniMax 300 utilizza una tecnologia di rilevamento delle cellule unica e in attesa di brevetto, StainFree, che consente di eseguire la proliferazione cellulare, la citotossicità e altri saggi senza macchie nucleari come il DAPI, che intercala il DNA, o coloranti per cellule vive che sono effettivamente tossici per le cellule a lungo termine.