Estabelecidas no final dos anos 70 a partir do sangue periférico de um rapaz jovem com leucemia de células T, as células de Jurkat são uma linha imortalizada de células linfócitos T. Elas têm sido usadas para estudar a leucemia das células T, a sinalização das células T e a sensibilidade das células cancerígenas aos tratamentos medicamentosos. Estas pequenas células redondas crescem rapidamente em suspensão e também têm sido usadas como um sistema modelo para vários ensaios de viabilidade celular e apoptose, como demonstrado aqui.
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Figure 1: Contagem de células livres de manchas
Células de jurkat foram imitadas usando o espectrômetro SpectraMax MiniMax 300, e as células foram identificadas usando a configuração pré-definida ‘CellsC’. À esquerda são mostradas as imagens de luz transmitidas originalmente e à direita as mesmas imagens com máscaras roxas indicando as células identificadas pelo software. São mostradas duas densidades de células: 50.000 e 1562 células semeadas por poço de uma placa de 96 poços.
Figure 2: Contagem de células livres de manchas vs. contagem de células fluorescentes
Células de Jurkat semeadas em densidades que variam de 390 a 50.000 células por poço foram contadas usando a tecnologia StainFree (pontos azuis), ou foram coradas com EarlyTox™. As contagens de células obtidas com ambos os métodos foram acordadas de perto em toda a gama de densidades de células. As contagens de células foram medidas para quatro locais imitados por poço.
Figure 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Células de Jurkat foram tratadas com diluições em série de estaurosporina (parcela vermelha), camptothecin (parcela verde) e etoposide (parcela azul) durante 24 horas e depois ensaiadas usando Dispositivos Moleculares EarlyTox Live/Dead Assay Kit. As células vivas foram coradas com calceína AM (corante verde), e as células mortas foram coradas com homodímero de etídio (corante vermelho) e lidas em um leitor de microplaca SpectraMax i3x Multi-Mode usando o recurso WellScan, que realiza múltiplas leituras espaçadas regularmente através do poço. Os resultados foram plotados como proporção de concentração verde/vermelho em relação à concentração composta. Todos os compostos utilizados nesta experiência causaram uma redução dramática na viabilidade celular em 24 horas.
Figure 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Ensaio
Células de Jurkat foram tratadas com estaurosporina (parcela vermelha), camptotecina (parcela verde), ou etoposídeo (parcela azul) durante 28 horas e depois ensaiadas para apoptose usando o Kit de Ensaio EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488. As células que expressam caspase-3/7 foram coloridas de verde fluorescente e foram imitadas e contadas usando o SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer.
Tip:
Pelas suas morfologia arredondada e tamanho uniforme, as células de Jurkat são bastante fáceis de serem imageadas e contadas. Para a contagem de células StainFree, o ‘CellsC’ predefinido no SoftMax Pro Software funciona muito bem.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Modo Plataforma de detecção de microplacas
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Ciclímetro de imagens
- SoftMax® Pro Software
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| Parâmetro | Configuração para contagem de células |
| Configuração óptica | SpectraMax MiniMax 300 Ciclímetro de Imagem |
| Modo de leitura | Imaging |
| Tipo de leitura | Ponto final |
| Configurações de comprimento de onda | Luz transmitida |
| Configurações de aquisição de imagem | Exposição: 7 ms |
| Ajustes de análise de imagem | Tipo de análise de imagem: Análise de objetos discretos Comprimento de onda para encontrar objetos: TL |
| Localizar objectos | Configuração: ‘CellsC’ predefinida |
Sobre a tecnologia de detecção de células livres de manchas
Os ensaios baseados em células de imagem requerem tipicamente o uso de sondas fluorescentes que podem ser tóxicas para as células vivas ou podem funcionar apenas em células fixas. Um método sem rótulos para analisar a contagem e confluência de células permite aos pesquisadores monitorar quantitativamente a proliferação e a saúde das células, sem fluxos de trabalho demorados que podem perturbar a viabilidade celular.
A plataforma de microplaca SpectraMax i3 Multi-Mode com o MiniMax 300 Imaging Cytometer usa uma tecnologia única de detecção de células sem manchas, com patente pendente, que permite realizar a proliferação celular, citotoxicidade e outros ensaios sem manchas nucleares como DAPI, que intercalam com o DNA, ou corantes de células vivas que são realmente tóxicos para as células a longo prazo.