Utworzone w późnych latach 70-tych z krwi obwodowej młodego chłopca z białaczką T-komórkową, komórki Jurkat są unieśmiertelnioną linią komórkową limfocytów T. Zostały one wykorzystane do badania białaczki T-komórkowej, sygnalizacji T-komórkowej oraz wrażliwości komórek nowotworowych na leczenie farmakologiczne. Te małe, okrągłe komórki łatwo rosną w zawiesinie i były również używane jako system modelowy dla różnych testów żywotności komórek i apoptozy, jak pokazano tutaj.
View StainFree Cell Detection Webinar
Download StainFree Cell Detection Application Note
无荧光染料的非标记细胞成像分析技术 >>
Download eBook: Count Cells Like a Pro
Figura 1: Zliczanie komórek StainFree
Komórki Jurkata obrazowano przy użyciu cytometru SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer, a komórki identyfikowano przy użyciu predefiniowanego ustawienia „CellsC”. Po lewej stronie pokazane są oryginalne obrazy w świetle przechodzącym, a po prawej te same obrazy z fioletowymi maskami wskazującymi komórki zidentyfikowane przez oprogramowanie. Pokazane są dwie gęstości komórek: 50 000 i 1562 komórki wysiane na studzienkę płytki 96-studzienkowej.
Rycina 2: StainFree cell counts vs. Fluorescencyjne zliczanie komórek
Komórki Jurkata posiane w gęstości od 390 do 50 000 komórek na studzienkę były zliczane przy użyciu technologii StainFree (niebieskie punkty), lub były barwione barwnikiem EarlyTox™ Live Cell Assay i zliczane były komórki fluoryzujące na zielono (zielone punkty). Liczby komórek uzyskane za pomocą obu metod zgadzały się ściśle w całym zakresie gęstości komórek. Liczbę komórek zmierzono dla czterech miejsc obrazowanych na studzienkę.
Figura 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Komórki Jurkata poddano działaniu seryjnych rozcieńczeń staurosporyny (wykres czerwony), kamptotecyny (wykres zielony) i etopozydu (wykres niebieski) przez 24 godziny, a następnie oznaczono przy użyciu zestawu EarlyTox Live/Dead Assay firmy Molecular Devices. Żywe komórki wybarwiono kalceiną AM (zielony barwnik), a martwe komórki wybarwiono homodimerem etydyny (czerwony barwnik) i odczytano na czytniku mikropłytek SpectraMax i3x Multi-Mode z funkcją WellScan, która wykonuje wiele odczytów rozmieszczonych regularnie w studzience. Wyniki zostały wykreślone jako stosunek zielonego/czerwonego vs. stężenie związku. Wszystkie związki użyte w tym eksperymencie spowodowały dramatyczny spadek żywotności komórek w ciągu 24 godzin.
Figura 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Komórki Jurkat poddano działaniu staurosporyny (wykres czerwony), kamptotecyny (wykres zielony) lub etopozydu (wykres niebieski) przez 28 godzin, a następnie oznaczono apoptozę przy użyciu zestawu EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit. Komórki wykazujące ekspresję kaspazy-3/7 barwiono zieloną fluorescencją oraz obrazowano i liczono przy użyciu cytometru SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer.
Tip:
Dzięki zaokrąglonej morfologii i jednolitemu rozmiarowi, komórki Jurkat są dość łatwe do obrazowania i liczenia. W przypadku liczenia komórek bez użycia barwnika doskonale sprawdza się predefiniowana metoda „CellsC” w oprogramowaniu SoftMax Pro.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parametry | Ustawienia do zliczania komórek |
| Konfiguracja optyczna | SpectraMax Cytometr MiniMax 300 Imaging |
| Tryb odczytu | Imaging |
| Read type | Endpoint |
| Ustawienia długości fali | Światło przepuszczane |
| Ustawienia akwizycji obrazu | Ekspozycja: 7 ms |
| Ustawienia analizy obrazu | Typ analizy: Discrete Object Analysis Długość fali do wyszukiwania obiektów: TL |
| Znajdowanie obiektów | Ustawienia: 'CellsC’ ustawienie predefiniowane |
About StainFree Cell Detection Technology
Obrazowanie testów opartych na komórkach zazwyczaj wymaga użycia sond fluorescencyjnych, które mogą być toksyczne dla żywych komórek lub mogą działać tylko w komórkach utrwalonych. Bezetykietowa metoda analizy liczby komórek i ich konfluencji umożliwia badaczom ilościowe monitorowanie proliferacji i zdrowia komórek bez czasochłonnych procedur, które mogą zakłócić ich żywotność.
Platforma mikropłytkowa SpectraMax i3 Multi-Mode z cytometrem MiniMax 300 Imaging wykorzystuje unikalną, zgłoszoną do opatentowania technologię StainFree Cell Detection Technology, która umożliwia przeprowadzanie badań proliferacji komórek, cytotoksyczności i innych testów bez barwników jądrowych, takich jak DAPI, który interkaluje z DNA, lub barwników żywych komórek, które są toksyczne dla komórek w dłuższym okresie czasu.