Die Jurkat-Zellen wurden Ende der 1970er Jahre aus dem peripheren Blut eines Jungen mit T-Zell-Leukämie gewonnen und sind eine immortalisierte T-Lymphozyten-Zelllinie. Sie wurden zur Untersuchung der T-Zell-Leukämie, der T-Zell-Signalübertragung und der Empfindlichkeit von Krebszellen gegenüber medikamentösen Behandlungen verwendet. Diese kleinen, runden Zellen wachsen leicht in Suspension und wurden, wie hier gezeigt, auch als Modellsystem für verschiedene Zelllebensfähigkeits- und Apoptosetests verwendet.
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Abbildung 1: StainFree cell counts
Jurkat-Zellen wurden mit dem SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer abgebildet, und die Zellen wurden mit der vordefinierten Einstellung „CellsC“ identifiziert. Links sind die Originalbilder im Durchlicht dargestellt, rechts die gleichen Bilder mit lila Masken, die die von der Software identifizierten Zellen anzeigen. Es sind zwei Zelldichten dargestellt: 50.000 und 1562 Zellen pro Vertiefung einer 96-Well-Platte.
Abbildung 2: StainFree-Zellzahlen vs. Fluoreszenzzellen
Jurkat-Zellen, die in einer Dichte von 390 bis 50.000 Zellen pro Vertiefung ausgesät wurden, wurden mit der StainFree-Technologie (blaue Punkte) gezählt, oder sie wurden mit dem EarlyTox™ Live Cell Assay-Farbstoff angefärbt und grün fluoreszierende Zellen wurden gezählt (grüne Punkte). Die mit beiden Methoden ermittelten Zellzahlen stimmten über den gesamten Bereich der Zelldichten gut überein. Die Zellzahlen wurden für vier Stellen pro Vertiefung gemessen.
Abbildung 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Jurkat-Zellen wurden 24 Stunden lang mit seriellen Verdünnungen von Staurosporin (rotes Diagramm), Camptothecin (grünes Diagramm) und Etoposid (blaues Diagramm) behandelt und dann mit dem EarlyTox Live/Dead Assay Kit von Molecular Devices untersucht. Lebende Zellen wurden mit Calcein AM (grüner Farbstoff) und tote Zellen mit Ethidium-Homodimer (roter Farbstoff) angefärbt und auf einem SpectraMax i3x Multi-Mode-Mikroplattenlesegerät mit der WellScan-Funktion abgelesen, die mehrere Lesevorgänge in regelmäßigen Abständen über die Vertiefung durchführt. Die Ergebnisse wurden als Verhältnis von grünem/rotem Farbstoff gegen die Konzentration der Verbindung aufgetragen. Alle in diesem Experiment verwendeten Verbindungen verursachten innerhalb von 24 Stunden eine drastische Verringerung der Lebensfähigkeit der Zellen.
Abbildung 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Jurkat-Zellen wurden 28 Stunden lang mit Staurosporin (rotes Diagramm), Camptothecin (grünes Diagramm) oder Etoposid (blaues Diagramm) behandelt und anschließend mit dem EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit auf Apoptose untersucht. Zellen, die Caspase-3/7 exprimieren, wurden grün fluoreszierend angefärbt und mit dem SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer abgebildet und gezählt.
Tipp:
Dank ihrer runden Morphologie und einheitlichen Größe lassen sich Jurkat-Zellen relativ leicht abbilden und zählen. Für die färbungsfreie Zellzählung eignet sich das vordefinierte „CellsC“ in der SoftMax Pro Software hervorragend.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parameter | Einstellung für Zellzahlen |
| Optische Konfiguration | SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer |
| Lesemodus | Bildgebung |
| Lesetyp | Endpunkt |
| Wellenlängeneinstellungen | Durchlicht |
| Bilderfassungseinstellungen | Belichtung: 7 ms |
| Bildanalyseeinstellungen | Analysetyp: Diskrete Objektanalyse Wellenlänge für die Objektsuche: TL |
| Objektsuche | Einstellungen: ‚CellsC‘ vordefinierte Einstellung |
Über die StainFree Cell Detection Technology
Die Abbildung von zellbasierten Assays erfordert in der Regel die Verwendung von Fluoreszenzsonden, die für lebende Zellen toxisch sein können oder nur in fixierten Zellen funktionieren. Eine markierungsfreie Methode zur Analyse von Zellzahlen und Zellkonfluenz ermöglicht es Forschern, die Zellproliferation und -gesundheit quantitativ zu überwachen, ohne zeitaufwändige Arbeitsabläufe, die die Lebensfähigkeit der Zellen beeinträchtigen können.
Die SpectraMax i3 Multi-Mode-Mikrotiterplattenplattform mit MiniMax 300 Imaging Cytometer verwendet die einzigartige, zum Patent angemeldete StainFree Cell Detection Technology, die es Ihnen ermöglicht, Zellproliferation, Zytotoxizität und andere Tests ohne nukleare Färbemittel wie DAPI, das sich mit der DNA verbindet, oder Farbstoffe für lebende Zellen durchzuführen, die auf lange Sicht sogar toxisch für Zellen sind.