Las células Jurkat, creadas a finales de la década de 1970 a partir de la sangre periférica de un joven con leucemia de células T, son una línea celular de linfocitos T inmortalizada. Se han utilizado para estudiar la leucemia de células T, la señalización de las células T y la sensibilidad de las células cancerosas a los tratamientos farmacológicos. Estas células pequeñas y redondas crecen fácilmente en suspensión y también se han utilizado como sistema modelo para varios ensayos de viabilidad celular y apoptosis, como se demuestra aquí.
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Figura 1: Recuento de células StainFree
Las células de Jurkat se visualizaron utilizando el citómetro de imágenes SpectraMax MiniMax 300, y las células se identificaron utilizando el ajuste predefinido ‘CellsC’. A la izquierda se muestran las imágenes originales de luz transmitida y a la derecha las mismas imágenes con máscaras moradas que indican las células identificadas por el software. Se muestran dos densidades de células: 50.000 y 1562 células sembradas por pocillo de una placa de 96 pocillos.
Figura 2: Recuento de células StainFree frente a recuentos de células fluorescentes
Las células Jurkat sembradas a densidades que van de 390 a 50.000 células por pocillo se contaron utilizando la tecnología StainFree (puntos azules), o se tiñeron con el colorante EarlyTox™ Live Cell Assay y se contaron las células fluorescentes verdes (puntos verdes). Los recuentos celulares obtenidos con ambos métodos coincidieron estrechamente en toda la gama de densidades celulares. Los recuentos celulares se midieron para cuatro sitios fotografiados por pozo.
Figura 3: Ensayo EarlyTox™ Live/Dead
Las células Jurkat fueron tratadas con diluciones seriadas de estaurosporina (diagrama rojo), camptotecina (diagrama verde) y etopósido (diagrama azul) durante 24 horas y luego se analizaron utilizando el kit de ensayo EarlyTox Live/Dead de Molecular Devices. Las células vivas se tiñeron con calceína AM (colorante verde), y las células muertas se tiñeron con homodímero de etidio (colorante rojo) y se leyeron en un lector de microplacas multimodo SpectraMax i3x utilizando la función WellScan, que realiza múltiples lecturas espaciadas regularmente a través del pozo. Los resultados se representaron en forma de relación verde/rojo frente a la concentración del compuesto. Todos los compuestos utilizados en este experimento provocaron una drástica reducción de la viabilidad celular en 24 horas.
Figura 4: Ensayo EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488
Las células Jurkat se trataron con estaurosporina (gráfico rojo), camptotecina (gráfico verde) o etopósido (gráfico azul) durante 28 horas y luego se analizó la apoptosis utilizando el kit de ensayo EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488. Las células que expresan la caspasa-3/7 se tiñeron de verde fluorescente y se obtuvieron imágenes y se contaron utilizando el citómetro de imágenes SpectraMax MiniMax 300.
Tip:
Gracias a su morfología redondeada y a su tamaño uniforme, las células Jurkat son bastante fáciles de obtener imágenes y de contar. Para el recuento de células StainFree, la función predefinida ‘CellsC’ del software SoftMax Pro funciona muy bien.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parámetro | Configuración para el recuento de células |
| Configuración óptica | SpectraMax Citómetro de imagen MiniMax 300 |
| Modo de lectura | Imagen |
| Tipo de lectura | Punto final |
| Configuración de la longitud de onda | Luz transmitida |
| Configuración de la adquisición de imágenes | Exposición: 7 ms |
| Configuración del análisis de imágenes | Tipo de análisis: Análisis de objetos discretos Longitud de onda para encontrar objetos: TL |
| Búsqueda de objetos | Configuración: ajuste predefinido ‘CellsC’ |
Acerca de la tecnología de detección de células sin etiquetas
La obtención de imágenes de ensayos basados en células suele requerir el uso de sondas fluorescentes que pueden ser tóxicas para las células vivas o que sólo pueden funcionar en células fijas. Un método sin etiquetas para analizar el recuento de células y la confluencia celular permite a los investigadores supervisar cuantitativamente la proliferación y la salud de las células sin flujos de trabajo que requieran mucho tiempo y que puedan alterar la viabilidad celular.
La plataforma de microplacas multimodo SpectraMax i3 con el citómetro de captura de imágenes MiniMax 300 utiliza la exclusiva tecnología de detección celular StainFree, pendiente de patente, que le permite realizar ensayos de proliferación celular, citotoxicidad y otros sin tinciones nucleares como DAPI, que se intercala con el ADN, o tintes de células vivas que son realmente tóxicos para las células a largo plazo.