Step Two: Tissue Processing
Após o doador ter passado pelo processo de triagem, várias etapas são tomadas para assegurar o processamento padronizado do tecido do aloenxerto. Todos os tecidos são processados com técnicas “assépticas”, que incorporam técnicas padrão de sala de cirurgia. Quando os tecidos são obtidos do doador, o termo colheita tem sido respeitosamente substituído por recuperação. Há limites de tempo para a recuperação dos tecidos. Uma janela de 24 horas é estabelecida durante a qual os tecidos do corpo devem ser recuperados pelos padrões AATB.
Recuperação é feita na maioria das vezes em um bloco operatório ou em um centro de recuperação designado. Ocasionalmente, isto pode ser feito em uma morgue. Uma equipe de técnicos auxilia neste procedimento cirúrgico. As técnicas da sala de cirurgia, incluindo a preparação e o drapejamento do doador, são semelhantes às dos protocolos operacionais padrão. A técnica estéril é usada com cortinas, vestidos, luvas e instrumentos esterilizados. Cada tecido é colhido, cultivado, embalado, rotulado, selado e enviado em recipientes dedicados a temperaturas de congelamento. A maioria destes tecidos é recuperada com esta técnica asséptica de recuperação de tecidos. A contaminação pode ocorrer durante este processo ou durante a transferência para os recipientes antes de chegar ao banco de tecidos. Esta técnica asséptica não deve ser considerada um processo estéril. A contaminação tem sido documentada como proveniente do trato gastrointestinal ou respiratório do doador (contaminação agonal).10,12 Surtos recentes documentaram esta contaminação após a morte com a quebra do sistema gastrointestinal, bem como a recuperação após assistolia em momentos tardios fora dos padrões do banco de tecidos.23
Os bancos de tecidos examinam a carga biológica da superfície tecidual e o líquido tecidual que a acompanha dos tecidos recebidos. Bioburden é definido como o número de organismos contaminados encontrados em uma determinada quantidade de material antes de serem submetidos a um procedimento de esterilização. O tecido do aloenxerto tem uma superfície física complexa com fissuras e fissuras que dificultam a remoção de todos os potenciais patógenos. Está documentado que as culturas de esfregaços de superfície são apenas 70% a 92% sensíveis.26 A Convenção Farmacopéia dos EUA18 , o padrão da indústria médica para testes de esterilidade e outros procedimentos de controle de qualidade, declarou que as culturas de esfregaços não devem ser usadas para evidências definitivas de esterilização. As culturas devem ser usadas para monitorar processos de esterilização previamente validados. Alguns bancos de tecidos rejeitarão os tecidos se houver uma grande quantidade de carga biológica quando eles receberem inicialmente o tecido.
Ao processar o tecido, os bancos de tecidos se esforçam para limpar e esterilizar o tecido para transplante. A esterilização é definida como um processo que mata todas as formas de vida, especialmente os microorganismos. A esterilidade tem sido expressa como uma probabilidade matemática de risco. A FDA estabeleceu um nível de seguro de esterilidade (SAL) 10-3 como adequado para dispositivos médicos biológicos implantáveis. Isto significa que há uma probabilidade de 1 em 1000 (probabilidade) de um micróbio vivo viável existir no ou sobre o dispositivo implantável. Os aloenxertos musculoesqueléticos convencionais são rotineiramente classificados como HCT/P pelo FDA/Center for Biologics Evaluation in Research (CBER). A Association for the Advancement of Medical Instrumentation (AAMI)4 afirma que uma SAL de 10-6 é apropriada para dispositivos médicos. Atualmente, a AATB requer um SAL de 10-6 como padrão, diferente do da FDA.3
Diferentes técnicas de esterilização e processamento validadas são atualmente utilizadas pelos principais bancos de tecidos dos Estados Unidos. Técnicas de processamento mais recentes continuam a ser desenvolvidas para melhorar a segurança dos tecidos. A maioria dos processos de esterilização são baseados no tratamento de tecidos “espigados” com diferentes patógenos ou os tecidos emergem ou são mergulhados em fluidos contendo os patógenos de interesse. Biologicamente, isto não é o mesmo que o tecido que foi “sistemicamente” infectado. A validade dessas técnicas de teste precisa de mais estudos.
A FDA é o órgão máximo que governa a indústria de bancos de tecidos, mas não declara especificamente qual técnica de processamento de esterilização é a melhor ou qual deve ser usada. Dentro das recentes regras para GTP, a FDA exige que qualquer estabelecimento de banco de tecidos que faça uma declaração escrita de esterilidade de alograft com sua rotulagem será sujeito a inspeções surpresa e revisão pela FDA.19,22 Cada banco de tecidos deve ter dados validados para suas declarações de esterilidade pelo seu método individual de processamento de tecidos. A maioria dos bancos de tecidos usa uma fórmula proprietária de diferentes detergentes biológicos, álcool, antibióticos e peróxido de hidrogênio.
Table 9-1 lista exemplos de alguns dos principais processos dos bancos de tecidos, incluindo fórmulas como Allowash XG by Lifenet, que usa uma técnica de esfoliação e etapas intensivas de descontaminação com álcool, antibióticos e peróxido de hidrogênio. O processo BioCleanse tissue da Regeneration Technologies, Inc. (RTI), utiliza um processo automatizado a vácuo e baixa temperatura com peróxido de hidrogênio e álcool. A Musculoskeletal Transplantation Foundation (MTF) utiliza um processo de purificação de tecidos aloenxertos (ATP), um detergente não cónico, peróxido de hidrogénio e álcool com um cocktail de antibióticos. O Tissue Bank International (TBI) possui o TranZgraft, um processo de esterilização proprietário utilizado a baixa temperatura. Allosource utiliza o Esterilizador Validado como processo de desinfecção. Estes bancos de tecidos validaram os seus processos de esterilização individuais a um nível de SAL de 10-6
O método de processamento de tecidos deve ser eficaz na inactivação de vírus e na eliminação de bactérias. Ele deve penetrar efetivamente no tecido e ser removido com segurança do tecido, preservando as propriedades mecânicas e biológicas do tecido.
Nenhuma técnica comprovada é mais eficaz no processamento ou esterilização de tecidos aloenxertos para uso humano. Estudos de longo prazo são necessários para avaliar as diferentes técnicas de processamento ao longo do tempo. Nem todos os aloenxertos musculoesqueléticos de tecido mole podem ser esterilizados com segurança. Os condrócitos nos aloenxertos de cartilagem articular podem ser irremediavelmente danificados por diferentes técnicas de processamento.
A radiação gama é um agente de esterilização muito eficaz que gera radicais livres, que podem afectar negativamente a estrutura do colagénio. Tem sido documentado que doses maiores de radiação são deletérias para o tecido, e neste momento, a radiação de baixa dose é comumente usada pelos bancos de tecidos para remover contaminantes superficiais.6,9
Poucos bancos de tecidos usam um processo de liofilização (liofilização). Isto permite que o tecido do aloenxerto seja armazenado à temperatura ambiente em uma embalagem selada. Este processo de liofilização congela o tecido e o conteúdo de água é reduzido a menos de 6% do seu peso inicial. Isto é feito por um processo de secagem primária chamado sublimação, que é seguido por um processo de secagem secundária chamado dessorção. Esta redução do conteúdo de água não suporta qualquer actividade biológica ou reacções químicas no tecido. Geralmente, os aloenxertos liofilizados não são comumente utilizados para aplicações na medicina esportiva nos Estados Unidos. Eles são amplamente utilizados para procedimentos de reconstrução não ortopédicos nos campos neurocirúrgico e urológico.