Hvad er et antidiotypisk antistof?

Som vist i figur 1 binder et anti-idiotypisk (Anti-ID) antistof til idiotypen af et andet antistof, som regel et antistoflægemiddel. En idiotype kan defineres som den specifikke kombination af idiotoper, der findes i et antistofs komplementbestemmende regioner (CDR’er). En enkelt idiotop er en specifik region i et antistofs Fv-region, som binder til et andet antistofs paratop (antigene epitopbindingssted). Derfor kan en idiotop næsten betragtes som synonymt med et antistofs antigeniske determinant.

Figur 1. Struktur af antiidiotype-antistof. (A) Paratoppen af et antistoflægemiddel vil binde til epitopen af et målantigen inden for antistoflægemidlets CDR-region. (B) Paratopet af et anti-ID vil binde til idiotopet af dets mål-antistoflægemiddel. Idiotopen befinder sig inden for antistoflægemidlets CDR-region og kan være ved siden af, identisk med eller langt fra antistoflægemidlets antigenbindingssted.

Typer af anti-id-antistoffer

Der findes tre hovedklassifikationer af detektionsbaserede anti-ID-antistoffer, som vist i figur 2. Den første er et antigenblokerende anti-ID-antistof, der har fået dette navn, fordi de målrettede antistoffers paratope og idiotope overlapper hinanden. På grund af dette vil antistoflægemidlets målantigen og anti-ID-antistoffet konkurrere med hinanden. Derfor vil denne form for antiID-antistof kun påvise frit antistofpræparat. Den anden klassificering af anti-ID-antistoffer kaldes ikke-bokerende, fordi antistofstoffets paratop og idiotop ikke overlapper hinanden. Derfor kan antiID-antistoffet og antigenet samtidig binde til antistofpræparatet uden at påvirke hinandens bindingsevne. På grund af dette anvendes ikke-blokkerende anti-ID-antistoffer til at påvise alle former for tilgængelige antistofpræparater (frie eller antigenbundne). Den tredje klassificering af anti-ID-antistof er et komplekst specifikt anti-ID-antistof. Det skyldes, at anti-ID-antistoffet ikke kan binde til antistofstoffet, medmindre stoffet allerede er bundet til dets antigen. Derfor kan denne type antiID-antistof kun påvise bundet antistofpræparat.

Figur 2. Typer af antiidiotype antistoffer. (A) Antigenblokerende anti-ID’er binder direkte til antigenbindingsstedet for et antistoflægemiddel og konkurrerer direkte med målantigenet. (B) Den idiotype, som ikke-blokerende anti-ID’er binder sig til, overlapper slet ikke med antistoflægemidlets paratop, hvilket gør det muligt for antistoflægemidlet at binde målantigenet og en anti-ID samtidig. (c) Komplekse specifikke anti-ID’er vil kun binde til idiotopen af et antistoflægemiddel, når dette lægemiddel allerede er bundet til sit passende antigen.

Anvendelser af anti-idioideotype antistoffer

Farmakokinetiske analyser

Da de fleste anti-ID-antistoffer genereres mod et specifikt antistoflægemiddel, anvendes de almindeligvis i præklinisk praksis til farmakokinetiske (PK) analyser. PK er undersøgelsen af lægemiddelmetabolismen i hele kroppen. Specifikt vil klinikere bestemme hastigheden af lægemiddelabsorption, distribution, biotilgængelighed og udskillelse i forskellige kohorter af patienter. For at opnå dette skal forskerne være i stand til at spore antistoflægemidler, der er bundet eller ikke er bundet til deres udpegede mål på forskellige tidspunkter efter levering. Ved hjælp af anti-ID’er, primært mAb’er, kan forskellige former for antistofterapeutika let spores og kvantificeres i patienters serum, blod, urin eller andre kropsvæsker. Eksempler på farmakokinetiske analyser (ELISA-format) med anti-ID’er er vist i figur 3.

Figur 3. Typer af ELISA-baserede PK-analyser. Der er 4 almindelige måder at udføre et ELISA-baseret PK-assay på. (1) Antigenindfangningsassayet indebærer en antigenbelagt plade, som er højlydt til at binde frit antistoflægemiddel. Et mærket anti-ID vaskes derefter over antistofstoffet, bindes og visualiseres. En lignende visualiseringsprotokol anvendes til de tre andre typer PK-assays. (2) Et Anti-ID bridging assay indebærer en antiID-belagt plade, som skylles over med et frit antistoflægemiddel efterfulgt af et mærket antiID. (3) Et anti-ID capture sandwich-assay indebærer en anti-ID-belagt plade, der vaskes med et mærket anti-ID-konstant område IgG. (4) Et anti-ID antigen-bridging assay er, når en anti-ID-belagt plade vaskes med antistofpræparat bundet til et mærket antigen.

Immunogenicitetsanalyser

Polyklonale anti-ID’er anvendes almindeligvis til immunogenicitetsanalyser som referencekontrol. Immunogenicitet er et terapeutisk lægemiddels, f.eks. et antistof, evne til at fremkalde et humoral og/eller celleformet immunrespons, som fører til udvikling af antistof-antistoffer (ADA’er). ADA’er fører til en ophævelse af alle antistoflægemiddelrelaterede virkninger og hæmmer i det væsentlige fuldstændigt lægemidlets terapeutiske aspekt. Det er derfor ekstremt vigtigt for forskere at analysere immunogeniciteten af et nyt antistoflægemiddel under den prækliniske analyse. En ADA ligner meget en anti-IDs, da begge binder til det samme antistoflægemiddel, og derfor kan en pulje af polyklonale anti-IDs anvendes som positive kontroller, når man analyserer for tilstedeværelsen af ADAs i patientprøver. Et eksempel på en ELISA-baseret immunogenicitetsundersøgelse, hvor der anvendes et anti-ID som positiv kontrol, er vist i figur 4.

Figur 4. Typer af immunogenicitetsanalyser. (A) Hvis et antistoflægemiddel inducerer udvikling af ADA’er, kan ADA’erne visualiseres ved hjælp af en ELISA med direkte binding. I dette assay vaskes en antistofpræparatbelagt plade med serum. Pladen vaskes derefter med et mærket IgG, som kun binder til den konstante region af ADA’er. ELISA-prøven vil derfor kun fluorescere, hvis der er ADA’er til stede i prøveserummet. (B) Ved en brobygnings-ELISA-assay udsættes en antistofpræparatbelagt plade for ADA-holdigt serum, som binder til et ScFv-område af et antistofpræparat. Den resterende ADA ScFv-region binder til en mærket version af det samme antistofpræparat. Begge disse assays skal analyseres via en positiv kontrol, såsom anti-ID’er.

GenScripts Anti-Idiotype Anti-Idiotype Antibody Generation Packages

GenScript tilbyder nu forskellige anti-ID-genereringspakker, som er specifikke for den downstream-applikation, værtsspecies og klonalitet, som du vælger. GenScripts anti-ID-genereringspakker omfatter….

Rodent mAb: Immuniser mus eller rotter med dit antistofpræparat for at udvikle stærke anti-ID antistoffer genereret på så lidt som 3 måneders tid til den perfekte pris! Leverancerne omfatter stabile hybridomcellelinjer, oprenset mAb og en fuldt omfattende COA-rapport med analyse af blokeringstype og specificitetstestning.

Rabbit mAb: Anti-ID-antistoffer genereret ved hjælp af GenScripts MonoRabTM-platform binder med den højeste specificitet og følsomhed på markedet. Efter en intern analyse af forældreklonens supernatant går positive kloner gennem V-regions-sekventering, hvilket giver mulighed for optimal rekombinant ekspression af din valgte mAb. Denne pakke omfatter også garanteret levering af et andet biotin-konjugeret anti-ID mAb-par for at muliggøre nem generering af sandwich ELISA-baseret PK-analyse.

Rabbit pAb: GenScript’s rabbit pAbs giver en bekvem turn around tid og prisklasse for kunder, der er interesseret i at bruge polyklonale anti-ID’er til immunogenicitetsanalyse. Ved hjælp af vores ekspres antistofgenereringsprotokol og omfattende oprensning og screeningsproces er GenScript kanin anti-ID pAb’er en pålidelig mulighed for dit næste projekt.

Klik her for at lære om færdige anti-idiotype antistofprodukter mod blockbuster-lægemidler.