Jurkat-celler er en immortaliseret T-lymfocytcellelinje, der blev etableret i slutningen af 1970’erne fra det perifere blod fra en ung dreng med T-celle-leukæmi. De er blevet brugt til at undersøge T-celle-leukæmi, T-celle-signalering og kræftcellers følsomhed over for lægemiddelbehandlinger. Disse små, runde celler vokser let i suspension og er også blevet brugt som et modelsystem til forskellige celleviabilitets- og apoptoseanalyser, som det er vist her.
Se StainFree Cell Detection Webinar
Download StainFree Cell Detection Application Note
无荧光染料的非标记细胞成像分析技术 >>>
Download e-bog: Count Cells Like a Pro
Figur 1: StainFree cell counts
Jurkat-celler blev afbilledet ved hjælp af SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer, og cellerne blev identificeret ved hjælp af den foruddefinerede “CellsC”-indstilling. Til venstre ses de originale billeder i transmitteret lys, og til højre ses de samme billeder med lilla masker, der angiver celler identificeret af softwaren. Der er vist to celletætheder: 50.000 og 1562 celler udsået pr. brønd i en 96-hulsplade.
Figur 2: StainFree celletal vs. fluorescerende celletællinger
Jurkat-celler, der var udsået ved tætheder fra 390 til 50.000 celler pr. brønd, blev talt ved hjælp af StainFree-teknologi (blå prikker), eller de blev farvet med EarlyTox™ Live Cell Assay-farvestof, og grønne fluorescerende celler blev talt (grønne prikker). Celletællinger opnået med begge metoder stemte nøje overens i hele området af celletætheder. Celletallene blev målt for fire steder, der blev afbildet pr. brønd.
Figur 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Jurkat-celler blev behandlet med serielle fortyndinger af staurosporin (rødt plot), camptothecin (grønt plot) og etoposid (blåt plot) i 24 timer og blev derefter analyseret ved hjælp af Molecular Devices EarlyTox Live/Dead Assay Kit. Levende celler blev farvet med calcein AM (grønt farvestof), og døde celler blev farvet med ethidium homodimer (rødt farvestof) og aflæst på en SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader ved hjælp af WellScan-funktionen, som udfører flere aflæsninger med regelmæssige mellemrum på tværs af brønden. Resultaterne blev plottet som forholdet mellem grønt/rødt og koncentrationen af stoffet. Alle forbindelser, der blev anvendt i dette eksperiment, forårsagede en dramatisk reduktion i cellernes levedygtighed inden for 24 timer.
Figur 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Jurkat-celler blev behandlet med staurosporin (rødt plot), camptothecin (grønt plot) eller etoposid (blåt plot) i 28 timer og derefter analyseret for apoptose ved hjælp af EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay-sættet. Celler, der udtrykker caspase-3/7, blev farvet grønt fluorescerende og blev afbildet og talt ved hjælp af SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer.
Tip:
Takket være deres afrundede morfologi og ensartede størrelse er Jurkat-celler ret nemme at afbilde og tælle. Til StainFree celletælling fungerer den foruddefinerede ‘CellsC’ i SoftMax Pro Software fremragende.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parameter | Indstilling til celletællinger |
| Optisk konfiguration | SpectraMax MiniMax 300 billeddannende cytometer |
| Læsningstilstand | Billeddannelse |
| Læsningstype | Endpunkt |
| Bølgelængdeindstillinger | Transmitteret lys |
| Indstillinger for billedindsamling | Belysning: 7 ms |
| Billedanalyseindstillinger | Analyse type: Diskret objektanalyse Bølgelængde til at finde objekter: TL |
| Find objekter | Indstillinger: ‘CellsC’ foruddefineret indstilling |
Om StainFree Cell Detection Technology
Afbildning af cellebaserede assays kræver typisk brug af fluorescerende prober, der kan være giftige for levende celler eller måske kun fungerer i fikserede celler. En mærkningsfri metode til analyse af celletal og cellekonfluens giver forskere mulighed for kvantitativt at overvåge cellers spredning og sundhed uden tidskrævende arbejdsgange, der kan forstyrre cellens levedygtighed.
SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform med MiniMax 300 Imaging Cytometer anvender en unik, patentanmeldt StainFree Cell Detection Technology, der giver dig mulighed for at udføre celleproliferation, cytotoksicitet og andre analyser uden nukleare farvestoffer som DAPI, der interkalerer med DNA, eller levende cellefarvestoffer, der faktisk er giftige for celler på lang sigt.