Jurkat-solut on kuolematon T-lymfosyyttisolulinja, joka perustettiin 1970-luvun lopulla T-soluleukemiaa sairastavan nuoren pojan perifeerisestä verestä. Niitä on käytetty T-soluleukemian, T-solujen signaloinnin ja syöpäsolujen herkkyyden tutkimiseen lääkehoidoille. Nämä pienet, pyöreät solut kasvavat helposti suspensiossa, ja niitä on myös käytetty mallijärjestelmänä erilaisissa solujen elinkelpoisuus- ja apoptoosimäärityksissä, kuten tässä osoitetaan.
Katso StainFree Cell Detection Webinar
Lataa StainFree Cell Detection Application Note
无荧光染料的非标记细胞成像分析技术 >>
Lataa eBook: Count Cells Like a Pro
Kuva 1: StainFree-solujen laskenta
Jurkat-solut kuvattiin SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometerillä, ja solut tunnistettiin käyttämällä ennalta määritettyä ”CellsC”-asetusta. Vasemmalla näkyvät alkuperäiset läpivalaisukuvat ja oikealla samat kuvat, joissa on violetit maskit, jotka osoittavat ohjelmiston tunnistamat solut. Kuvassa on kaksi solutiheyttä:
Kuvio 2: StainFree-solujen lukumäärä vs. fluoresoivien solujen lukumäärät
Jurkat-solut, jotka oli kylvetty tiheyksillä 390-50 000 solua kuoppaa kohti, laskettiin StainFree-tekniikalla (siniset pisteet) tai ne värjättiin EarlyTox™ Live Cell Assay -väriaineella ja laskettiin vihreästi fluoresoivat solut (vihreät pisteet). Molemmilla menetelmillä saadut solujen lukumäärät vastasivat hyvin toisiaan koko solutiheysalueella. Solumäärät mitattiin neljästä kuoppakohtaisesti kuvatusta kohdasta.
Kuvio 3. Tutkimuksen tulokset: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Jurkat-soluja käsiteltiin 24 tunnin ajan staurosporiinin (punainen kuvaaja), kamptotetosiinin (vihreä kuvaaja) ja etoposidin (sininen kuvaaja) sarjalaimennoksilla, minkä jälkeen ne määritettiin Molecular Devicesin EarlyTox Live/Dead Assay Kitillä. Elävät solut värjättiin kalseiini AM:llä (vihreä väriaine) ja kuolleet solut värjättiin etidiumhomodimeerillä (punainen väriaine), ja ne luettiin SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader -laitteella WellScan-toimintoa käyttäen, joka suorittaa useita lukemia tasaisin väliajoin kuopassa. Tulokset piirrettiin vihreän/punaisen suhteen ja yhdisteen konsentraation välisenä suhteena. Kaikki tässä kokeessa käytetyt yhdisteet aiheuttivat solujen elinkelpoisuuden dramaattisen vähenemisen 24 tunnin kuluessa.
Kuva 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Jurkat-soluja käsiteltiin staurosporiinilla (punainen kuvaaja), kamptotesiinilla (vihreä kuvaaja) tai etoposidilla (sininen kuvaaja) 28 tuntia, minkä jälkeen apoptoosi määritettiin EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay Kitillä. Kaspaasi-3/7:ää ilmentävät solut värjättiin vihreällä fluoresoivalla värillä, ja ne kuvattiin ja laskettiin SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer -mittarilla.
Vihje:
Pyöreän morfologiansa ja yhdenmukaisen kokonsa ansiosta Jurkat-solut on melko helppo kuvata ja laskea. StainFree-solujen laskennassa SoftMax Pro -ohjelmiston ennalta määritetty ’CellsC’ toimii erinomaisesti.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-…Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parametri | Solujen lukumäärän asetus |
| Optinen konfigurointi | SpectraMax… MiniMax 300 kuvantamissytometri |
| Lukutila | Kuvantaminen |
| Lukutyyppi | Päätepiste |
| Aallonpituusasetukset | Lähetty valo |
| Kuvan ottoasetukset | Valotus: 7 ms |
| Kuvan analyysiasetukset | Analyysityyppi: Discrete Object Analysis Aallonpituus kohteiden löytämiseksi: TL |
| Objektien etsiminen | Asetukset: ’CellsC’ esiasetettu asetus |
Tietoa StainFree Cell Detection Technology -teknologiasta
Solupohjaisten määritysten kuvantaminen edellyttää tyypillisesti fluoresoivien koettimien käyttöä, jotka voivat olla myrkyllisiä eläville soluille, tai ne voivat toimia vain kiinnitetyissä soluissa. Solujen lukumäärän ja solujen konfluenssin analysointiin tarkoitettu leimavapaa menetelmä antaa tutkijoille mahdollisuuden seurata kvantitatiivisesti solujen lisääntymistä ja terveyttä ilman aikaa vieviä työprosesseja, jotka voivat häiritä solujen elinkelpoisuutta.
The SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform with MiniMax 300 Imaging Cytometer käyttää ainutlaatuista, patenttia hakevaa StainFree Cell Detection Technology -teknologiaa, jonka avulla voit suorittaa solujen lisääntymistä, sytotoksisuutta ja muita määrityksiä ilman DNA:n kanssa interkaloituvia ydinvärjäyksiä, kuten DAPI:tä, tai elävien solujen väriaineita, jotka ovat itse asiassa myrkyllisiä soluille pitkällä tähtäimellä.