Etablies à la fin des années 1970 à partir du sang périphérique d’un jeune garçon atteint de leucémie à cellules T, les cellules Jurkat sont une lignée cellulaire de lymphocytes T immortalisés. Elles ont été utilisées pour étudier la leucémie à cellules T, la signalisation des cellules T et la sensibilité des cellules cancéreuses aux traitements médicamenteux. Ces petites cellules rondes se développent facilement en suspension et ont également été utilisées comme système modèle pour divers tests de viabilité cellulaire et d’apoptose, comme démontré ici.
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Figure 1 : Comptage des cellules StainFree
Les cellules de Jurkat ont été imagées à l’aide du cytomètre imageur SpectraMax MiniMax 300, et les cellules ont été identifiées à l’aide du paramètre prédéfini ‘CellsC’. Les images originales en lumière transmise sont présentées à gauche et les mêmes images à droite, avec des masques violets indiquant les cellules identifiées par le logiciel. Deux densités de cellules sont présentées : 50 000 et 1562 cellules ensemencées par puits d’une plaque à 96 puits.
Figure 2 : Comptage des cellules sans taches vs. Comptage des cellules fluorescentes
Les cellules Jurkat ensemencées à des densités allant de 390 à 50 000 cellules par puits ont été comptées à l’aide de la technologie StainFree (points bleus), ou elles ont été colorées avec le colorant EarlyTox™ Live Cell Assay et les cellules fluorescentes vertes ont été comptées (points verts). Les numérations cellulaires obtenues avec les deux méthodes concordaient étroitement sur toute la gamme de densités cellulaires. Le nombre de cellules a été mesuré pour quatre sites imagés par puits.
Figure 3 : Test EarlyTox™ Live/Dead
Les cellules de Jurkat ont été traitées avec des dilutions sérielles de staurosporine (tracé rouge), de camptothécine (tracé vert) et d’étoposide (tracé bleu) pendant 24 heures, puis testées à l’aide du kit de test EarlyTox Live/Dead de Molecular Devices. Les cellules vivantes ont été colorées avec de la calcéine AM (colorant vert) et les cellules mortes ont été colorées avec de l’homodimère d’éthidium (colorant rouge) et lues sur un lecteur de microplaques multimode SpectraMax i3x utilisant la fonction WellScan, qui effectue des lectures multiples espacées régulièrement dans le puits. Les résultats ont été représentés sous forme de rapport vert/rouge en fonction de la concentration du composé. Tous les composés utilisés dans cette expérience ont provoqué une réduction spectaculaire de la viabilité cellulaire en 24 heures.
Figure 4 : Test EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488
Les cellules de Jurkat ont été traitées avec de la staurosporine (tracé rouge), de la camptothécine (tracé vert) ou de l’étoposide (tracé bleu) pendant 28 heures, puis testées pour l’apoptose en utilisant le kit de test EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488. Les cellules exprimant la caspase-3/7 ont été colorées en vert fluorescent et ont été imagées et comptées à l’aide du cytomètre imageur SpectraMax MiniMax 300.
Tip:
Grâce à leur morphologie arrondie et leur taille uniforme, les cellules Jurkat sont assez faciles à imager et à compter. Pour le comptage des cellules sans taches, le prédéfini ‘CellsC’ du logiciel SoftMax Pro fonctionne très bien.
Boîte à outils d’analyse des cellules Jurkat
- SpectraMax® i3x Multi-.Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parameter | Setting for cell counts |
| Optical configuration | SpectraMax. Cytomètre imageur MiniMax 300 |
| Mode de lecture | Imagerie |
| Type de lecture | Endpoint |
| Paramètres de longueur d’onde | Lumière transmise |
| Paramètres d’acquisition d’image | Exposition : 7 ms |
| Paramètres d’analyse d’image | Type d’analyse : Analyse d’objets discrets Longueur d’onde pour la recherche d’objets : TL |
| Recherche d’objets | Paramètres : paramètre prédéfini ‘CellsC’ |
A propos de la technologie de détection cellulaire sans tache
L’imagerie des essais cellulaires nécessite généralement l’utilisation de sondes fluorescentes qui peuvent être toxiques pour les cellules vivantes ou ne fonctionner que dans des cellules fixées. Une méthode sans étiquette pour analyser le nombre de cellules et la confluence cellulaire permet aux chercheurs de surveiller quantitativement la prolifération et la santé des cellules sans flux de travail chronophages qui peuvent perturber la viabilité des cellules.
La plateforme de microplaques multimode SpectraMax i3 avec cytomètre imageur MiniMax 300 utilise une technologie de détection cellulaire StainFree unique et en attente de brevet qui vous permet de réaliser des analyses de prolifération cellulaire, de cytotoxicité et autres sans colorants nucléaires comme le DAPI, qui s’intercale avec l’ADN, ou des colorants pour cellules vivantes qui sont en fait toxiques pour les cellules sur le long terme.