Jurkat-celler är en immortaliserad T-lymfocytcellinje som bildades i slutet av 1970-talet från det perifera blodet från en ung pojke med T-cellleukemi. De har använts för att studera T-cellsleukemi, T-cellsignalering och cancercellers känslighet för läkemedelsbehandlingar. Dessa små, runda celler växer lätt i suspension och har också använts som ett modellsystem för olika celllivslighets- och apoptosanalyser, vilket visas här.
Se StainFree Cell Detection Webinar
Download StainFree Cell Detection Application Note
无荧光染料的非标记细胞成像分析技术 >>
Download eBook: Count Cells Like a Pro
Figur 1: StainFree cell counts
Jurkat-celler avbildades med hjälp av SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer och cellerna identifierades med hjälp av den fördefinierade inställningen ”CellsC”. Till vänster visas de ursprungliga bilderna i genomlyst ljus och till höger samma bilder med lila masker som anger celler som identifierats av programvaran. Två celltätheter visas: 50 000 och 1 562 celler som såtts per brunn i en 96-brunnsplatta.
Figur 2: StainFree cellantal vs. fluorescerande cellräkningar
Jurkat-celler som såtts vid tätheter från 390 till 50 000 celler per brunn räknades med hjälp av StainFree-tekniken (blå prickar), eller så färgades de med färgämnet EarlyTox™ Live Cell Assay och grönt fluorescerande celler räknades (gröna prickar). Cellräkningar som erhölls med båda metoderna stämde väl överens över hela intervallet av celltätheter. Cellantalet mättes för fyra avbildade platser per brunn.
Figur 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Jurkat-celler behandlades med seriella utspädningar av staurosporin (röd kurva), kamptothecin (grön kurva) och etoposid (blå kurva) i 24 timmar och analyserades sedan med hjälp av Molecular Devices EarlyTox Live/Dead Assay Kit. Levande celler färgades med calcein AM (grönt färgämne) och döda celler färgades med ethidiumhomodimer (rött färgämne) och avlästes på en SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader med hjälp av WellScan-funktionen, som utför flera avläsningar med jämna mellanrum över brunnen. Resultaten plottades som förhållandet mellan grönt/rött och koncentrationen av substansen. Alla föreningar som användes i detta experiment orsakade en dramatisk minskning av cellens livskraft inom 24 timmar.
Figur 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Jurkat-celler behandlades med staurosporin (röd kurva), kamptothecin (grön kurva) eller etoposid (blå kurva) i 28 timmar och därefter analyserades apoptos med hjälp av EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit. Celler som uttrycker caspase-3/7 färgades grönt fluorescerande och avbildades och räknades med SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer.
Tip:
Tack vare sin rundade morfologi och enhetliga storlek är Jurkat-cellerna ganska lätta att avbilda och räkna. För stainFree cellräkning fungerar den fördefinierade ”CellsC” i SoftMax Pro Software utmärkt.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parameter | Inställning för cellräkning |
| Optisk konfiguration | SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer |
| Läsningsläge | Imaging |
| Läsningstyp | Endpunkt |
| Våglängdsinställningar | Transmitterat ljus |
| Inställningar för bildinsamling | Exponering: 7 ms |
| Inställningar för bildanalys | Analystyp: Discrete Object Analysis Våglängd för att hitta objekt: TL |
| Fynd av objekt | Inställningar: ’CellsC’ fördefinierad inställning |
Om StainFree Cell Detection Technology
Avbildning av cellbaserade analyser kräver vanligtvis användning av fluorescerande prober som kan vara giftiga för levande celler eller som kanske bara fungerar i fixerade celler. En märkningsfri metod för att analysera cellantal och cellkonfluens gör det möjligt för forskare att kvantitativt övervaka cellproliferation och cellhälsa utan tidskrävande arbetsflöden som kan störa cellens livskraft.
Mikroplattplattformen SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform med MiniMax 300 Imaging Cytometer använder unik, patentsökt StainFree Cell Detection Technology som gör det möjligt att utföra cellproliferation, cytotoxicitet och andra analyser utan kärnfärgningar som DAPI, som interkalerar med DNA, eller färgämnen för levande celler som faktiskt är giftiga för cellerna på lång sikt.