1970年代後半にT細胞白血病の少年の末梢血から樹立されたJurkat細胞は、不死化Tリンパ球細胞株である。 T細胞白血病、T細胞シグナル伝達、薬剤治療に対する癌細胞の感受性を研究するために使用されてきた。 この小型で丸い細胞は、懸濁液中で容易に増殖し、ここで示すように、様々な細胞生存率およびアポトーシスアッセイのモデルシステムとして使用されています。
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Jurkat細胞はSpectraMax MiniMax 300イメージングサイトメーターでイメージングし、あらかじめ設定した「CellsC」設定で細胞を識別しました。 左はオリジナルの透過光画像、右は同じ画像にソフトウェアで識別された細胞を示す紫色のマスクをつけたものである。 2つの細胞密度が示されている。 96ウェルプレートの1ウェルあたり50,000個と1562個の細胞を播種したもの。 7975>
1ウェルあたり390～50,000個の密度で播種したJurkat細胞をStainFree技術でカウント（青い点）、またはEarlyTox™ Live Cell Assay色素で染色して緑色の蛍光細胞をカウント（緑の点）しました。 両手法で得られた細胞数は、細胞密度の全範囲でほぼ一致した。 細胞数の測定は、1ウェルあたり4ヶ所のイメージングについて行いました。
Figure 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Jurkat 細胞を、スタウロスポリン（赤プロット）、カンプトテシン（緑プロット）、エトポシド（青プロット）連続希釈液で24時間処理し、Molecular Devices社の EarlyTox Live/Dead Assay Kitを用いてアッセイを実施しました。 生細胞はカルセインAM（緑色色素）で染色し、死細胞はエチジウムホモダイマー（赤色色素）で染色し、SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Readerで、ウェル全体に一定の間隔で複数の読み取りを行うWellScan機能を使って読み取りました。 結果は、緑/赤の比率対化合物濃度としてプロットされた。 この実験で使用されたすべての化合物は、24時間以内に細胞生存率の劇的な減少を引き起こした。
Figure 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Jurkat 細胞をスタウロスポリン（赤プロット）、カンプトテシン（緑プロット）またはエトポシド（青プロット）で 28 時間処理し、次に EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit でアポトーシスについてアッセイしました。 caspase-3/7を発現している細胞は緑色に蛍光染色され、SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometerを用いてイメージングとカウントを行いました。 StainFree細胞のカウントには、SoftMax Proソフトウェアであらかじめ定義された「CellsC」が効果的です。
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multiマイクロプレート検出プラットフォーム
- SpectraMax® MiniMax™ 300イメージングサイトメーター
- SoftMax® Proソフトウェア
| パラメータ | 細胞数の設定 |
| 光学配置 | SpectraMax社製 MiniMax 300イメージングサイトメーター |
| 読み取りモード | イメージング |
| 読み取りタイプ | 終点 |
| 波長設定 | 透過光 |
| 画像取得設定 | 露光: 7 ms |
| 画像解析設定 | 解析タイプ: Discrete Object Analysis オブジェクトを見つけるための波長。 TL |
| オブジェクトの検索 | Settings: ‘CellsC’ predefined setting |
StainFree細胞検出技術について
細胞ベースのアッセイのイメージングには通常、生きている細胞に対して毒性のある、または固定した細胞でしか機能しない蛍光プローブを使用しなければならないことがあります。 細胞数および細胞コンフルエンスを分析するためのラベルフリー方法は、研究者が、細胞の生存率を乱す可能性のある時間のかかるワークフローなしで、細胞の増殖および健康を定量的に監視することを可能にします。
SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform with MiniMax 300 Imaging Cytometerは、独自の特許出願中のStainFree Cell Detection Technologyを使用しており、DNAとインターカレートするDAPIなどの核染色や、長期的には実際に細胞に有害な生細胞染色を使わずに細胞増殖、細胞障害、その他のアッセイを実行することが可能です。