Vad är en antidiotypisk antikropp?

Som visas i figur 1 binder en anti-idiotypisk antikropp (Anti-ID) till idiotypen hos en annan antikropp, vanligtvis ett antikroppsläkemedel. En idiotyp kan definieras som den specifika kombination av idiotoper som finns i en antikropps komplementbestämmande regioner (CDR). En enskild idiotop är en specifik region inom en antikropps Fv-region som binder till en annan antikropps paratop (antigena epitopbindningsplats). Därför kan en idiotop betraktas som nästan synonymt med en antikropps antigena bestämningsfaktor.

Figur 1. Struktur för antikroppar mot idiotyper. (A) Paratopen hos ett antikroppsläkemedel kommer att binda till epitopen hos ett målantigen inom antikroppsläkemedlets CDR-region. (B) Paratopen hos en anti-ID kommer att binda till idiotopen hos dess målantikroppsläkemedel. Idiotopen finns inom antikroppsläkemedlets CDR-region och kan vara bredvid, identisk med eller långt ifrån antikroppsläkemedlets antigenbindningsställe.

Typer av anti-ID-antikroppar

Det finns tre huvudklassificeringar av detekteringsbaserade anti-ID-antikroppar som visas i figur 2. Den första är en antigenblockerande anti-ID-antikropp, som kallas så eftersom de riktade antikropparnas paratop och idiotop överlappar varandra. På grund av detta kommer antikroppsläkemedlets målantigen och anti-ID-antikroppen att konkurrera med varandra. Därför kommer denna form av anti-ID-antikroppar endast att upptäcka fria antikroppsläkemedel. Den andra klassificeringen av anti-ID-antikroppar kallas icke-blockerande eftersom antikroppsläkemedlets paratop och idiotop inte överlappar varandra. Därför kan antiID-antikroppen och antigenet samtidigt binda till antikroppsläkemedlet utan att påverka varandras bindningsförmåga. På grund av detta används icke-blockerande anti-ID-antikroppar för att detektera alla former av tillgängliga antikroppsläkemedel (fria eller antigenbundna). Den tredje klassificeringen av anti-ID-antikroppar är komplexspecifika anti-ID-antikroppar. Detta beror på att anti-ID-antikroppen inte kan binda till antikroppsläkemedlet om inte läkemedlet redan är bundet till dess antigen. Därför kan denna typ av anti-ID-antikroppar endast detektera bundna antikroppsläkemedel.

Figur 2. Typer av antikroppar mot idiotyper. (A) Antigenblockerande anti-IDs binder direkt till den antigenbindande platsen för ett antikroppsläkemedel och konkurrerar direkt med målantigenet. (B) Den idiotyp som icke-blockerande anti-IDs binder till överlappar inte alls med antikroppsläkemedlets paratop, vilket gör att antikroppsläkemedlet kan binda sitt målantigen och en anti-ID samtidigt. (c) Komplexa specifika anti-IDs binder endast till idiotopen hos ett antikroppsläkemedel när detta läkemedel redan är bundet till sitt lämpliga antigen.

Användningsområden för anti-idiotoper av antikroppar

Farmakokinetiska analyser

Då de flesta anti-ID-antikroppar genereras mot ett specifikt antikroppsläkemedel, används de vanligen i preklinisk praxis för farmakokinetisk (PK) analys. PK är studiet av läkemedelsmetabolismen i hela kroppen. Specifikt kommer kliniker att bestämma hastigheten för läkemedelsabsorption, distribution, biotillgänglighet och utsöndring i olika kohorter av patienter. För att uppnå detta måste forskarna kunna spåra antikroppsläkemedel som är bundna eller obundna till sitt avsedda mål vid olika tidpunkter efter leverans. Genom att använda anti-IDs, främst mAb:s, kan olika former av antikroppsterapier lätt spåras och kvantifieras i patienters serum, blod, urin eller andra kroppsvätskor. Exempel på farmakokinetiska analyser (ELISA-format) med hjälp av anti-IDs visas i figur 3.

Figur 3. Typer av ELISA-baserade PK-analyser. Det finns fyra vanliga sätt att utföra en ELISA-baserad PK-analys. (1) Antigenfångstanalysen innebär en antigenbelagd platta som är högljudd för att binda fria antikroppsläkemedel. En märkt anti-ID tvättas sedan över antikroppsläkemedlet, binds och visualiseras. Ett liknande visualiseringsprotokoll används för de andra tre typerna av PK-analyser. (2) En Anti-ID bridging assay innebär en antiID-belagd platta som tvättas över med ett fritt antikroppsläkemedel följt av ett märkt antiID. (3) En anti-ID capture sandwich assay innebär en anti-ID-belagd platta som tvättas med ett märkt anti-ID-constant region IgG. (4) En anti-ID-antigen-bridge-assay innebär att en anti-ID-belagd platta tvättas med antikroppsläkemedel som är bundet till ett märkt antigen.

Immunogenicitetsanalyser

Polyklonala anti-ID används vanligen för immunogenicitetsanalyser som referenskontroller. Immunogenicitet är förmågan hos ett terapeutiskt preparat, t.ex. ett antikroppsläkemedel, att framkalla ett humoralt och/eller cellmedierat immunsvar som leder till utveckling av antidrog-antikroppar (ADA). ADA:er leder till att alla antikroppsläkemedelsrelaterade effekter förnekas, vilket i princip helt hämmar läkemedlets terapeutiska aspekt. Det är därför ytterst viktigt för forskare att analysera immunogeniciteten hos ett nytt antikroppsläkemedel under den prekliniska analysen. En ADA är mycket lik en anti-IDs eftersom båda binder till samma antikroppsläkemedel, därför kan en pool av polyklonala anti-IDs användas som positiva kontroller när man analyserar förekomsten av ADAs i patientprover. Ett exempel på en ELISA-baserad immunogenicitetsanalys som använder en anti-ID som positiv kontroll visas i figur 4.

Figur 4. Typer av immunogenicitetsanalyser. (A) Om ett antikroppsläkemedel inducerar utvecklingen av ADA:er kan ADA:erna visualiseras genom en ELISA med direktbindning. I denna analys tvättas en antikroppsläkemedelsbelagd platta med serum. Plattan tvättas sedan med ett märkt IgG som endast binder till ADA:s konstanta region. Därför kommer ELISA-testet endast att fluorescera om det finns ADA:er i serumprovet. (B) En överbryggande ELISA-analys innebär att en antikroppsläkemedelsbelagd platta exponeras för ADA-innehållande serum som binder till en ScFv-region i ett antikroppsläkemedel. Den återstående ADA ScFv-regionen binder till en märkt version av samma antikroppsläkemedel. Båda dessa tester måste analyseras via en positiv kontroll, t.ex. anti-IDs.

GenScripts Anti-Idiotype Anti-Idiotype Antibody Generation Packages

GenScript erbjuder nu distinkta anti-ID-genereringspaket, som är specifika för nedströmstillämpningen, värddjursslagen och den klonalitet som du väljer. GenScripts anti-ID generationspaket inkluderar….

Rodent mAb: Immunisera möss eller råttor med ditt antikroppsläkemedel för att utveckla starka anti-ID-antikroppar som genereras på så lite som 3 månaders tid till ett perfekt pris! Leveranserna omfattar stabila hybridomcellinjer, renat mAb och en heltäckande COA-rapport som analyserar blockeringstyp och specificitetstestning.

Rabbit mAb: Anti-ID-antikroppar som genereras med GenScripts MonoRabTM-plattform binder med den högsta specificiteten och känsligheten på marknaden. Efter en egen analys av föräldraklonens supernatant genomgår positiva kloner sekvensering av V-regionen, vilket möjliggör ett optimalt rekombinant uttryck av din valda mAb. Detta paket omfattar också garanterad leverans av ett andra biotinkonjugerat anti-ID mAb-par för att möjliggöra enkel generering av sandwich ELISA-baserad PK-analys.

Rabbit pAb: GenScript’s rabbit pAbs ger en bekväm leveranstid och prisintervall för kunder som är intresserade av att använda polyklonala anti-ID’s för immunogenicitetsanalys. Med hjälp av vårt protokoll för generering av express-antikroppar och omfattande renings- och screeningprocess är GenScript rabbit anti-ID pAb ett pålitligt alternativ för ditt nästa projekt.

Klicka här för att lära dig mer om färdiga anti-idiotyp-antikroppsprodukter mot blockbuster-läkemedel.