Mikä on anti-idiotyyppinen vasta-aine?

Kuten kuvassa 1 on esitetty, anti-idiotyyppinen (Anti-ID) vasta-aine sitoutuu toisen vasta-aineen, yleensä vasta-ainelääkkeen, idiotyyppiin. Idiotyyppi voidaan määritellä vasta-aineen komplementtia määrittävillä alueilla (CDR) olevien idiotooppien erityiseksi yhdistelmäksi. Yksittäinen idiotooppi on tietty alue vasta-aineen Fv-alueella, joka sitoutuu toisen vasta-aineen paratooppiin (antigeenisen epitoopin sitoutumiskohtaan). Näin ollen idiotooppia voidaan pitää lähes synonyyminä vasta-aineen antigeeniselle determinantille.

Kuvio 1. Antigeeninen epitooppi. Anti-idiotyyppisen vasta-aineen rakenne. (A) Vasta-ainelääkkeen paratooppi sitoutuu kohdeantigeenin epitooppiin vasta-ainelääkkeen CDR-alueella. (B) Anti-ID:n paratooppi sitoutuu kohdevasta-aineen idiotooppiin. Idiotooppi on vasta-ainelääkkeen CDR-alueella, ja se voi olla vasta-ainelääkkeen antigeenin sitoutumiskohdan vieressä, identtinen tai kaukana siitä.

Idioottivasta-aineiden tyypit

Idioottivasta-aineiden havaitsemiseen perustuvien anti-ID-vasta-aineiden pääluokituksia on kolme, kuten kuvassa 2 esitetään. Ensimmäinen on antigeenin estävä anti-ID-vasta-aine, joka on saanut nimensä siksi, että kohdevasta-aineiden paratooppi ja idiotooppi ovat päällekkäisiä keskenään. Tämän vuoksi vasta-ainelääkkeen kohdeantigeeni ja anti-ID-vasta-aine kilpailevat keskenään. Tämän vuoksi tämä anti-ID-vasta-aineen muoto havaitsee vain vapaan vasta-ainelääkkeen. Toista anti-ID-vasta-aineen luokittelua kutsutaan ei-salpaavaksi, koska vasta-ainelääkkeen paratooppi ja idiotooppi eivät ole päällekkäisiä. Näin ollen anti-ID-vasta-aine ja antigeeni voivat samanaikaisesti sitoutua vasta-aineeseen vaikuttamatta toistensa sitoutumiskykyyn. Tämän vuoksi ei-blokkaavia anti-ID-vasta-aineita käytetään kaikkien saatavilla olevien (vapaiden tai antigeeniin sitoutuneiden) vasta-ainemuotojen havaitsemiseen. Kolmas anti-ID-vasta-aineen luokitus on kompleksispesifinen anti-ID. Tämä johtuu siitä, että anti-ID-vasta-aine ei voi sitoutua vasta-ainelääkkeeseen, ellei lääke ole jo sitoutunut sen antigeeniin. Tämän vuoksi tämäntyyppinen anti-ID-vasta-aine pystyy havaitsemaan vain sitoutuneen vasta-aineen.

Kuva 2. Anti-idiotyyppisten vasta-aineiden tyypit. (A) Antigeenin estävät anti-ID:t sitoutuvat suoraan vasta-ainelääkkeen antigeenin sitoutumiskohtaan ja kilpailevat suoraan kohdeantigeenin kanssa. (B) Idiotyyppi, johon ei-blokkaavat anti-ID:t sitoutuvat, ei ole lainkaan päällekkäinen vasta-ainelääkkeen paratoopin kanssa, jolloin vasta-ainelääke voi sitoutua kohdeantigeeniinsä ja anti-ID:hen samanaikaisesti. (c) Kompleksispesifiset anti-ID:t sitoutuvat vasta-ainelääkkeen idiotooppiin vain silloin, kun kyseinen lääke on jo sitoutunut sopivaan antigeeniinsä.

Idotyyppivasta-aineiden käyttötarkoitukset

Farmakokineettiset määritykset

Koska useimmat anti-ID-vasta-aineet tuotetaan tiettyä vasta-ainelääkettä vastaan, niitä käytetään yleisesti prekliinisissä käytännöissä farmakokineettisiin (PK) analyyseihin. PK on lääkeainemetabolian tutkiminen koko elimistössä. Erityisesti kliiniset lääkärit määrittävät lääkkeen imeytymisnopeuden, jakautumisen, biologisen hyötyosuuden ja erittymisen eri potilaskohorteissa. Tätä varten tutkijoiden on pystyttävä seuraamaan vasta-ainelääkkeitä, jotka ovat sitoutuneet tai eivät ole sitoutuneet määrättyyn kohteeseensa eri ajankohtina toimituksen jälkeen. Anti-ID:ien, ensisijaisesti mAb:ien, avulla voidaan helposti seurata ja kvantifioida erilaisia vasta-ainelääkkeitä potilaan seerumissa, veressä, virtsassa tai muissa ruumiinnesteissä. Esimerkkejä farmakokineettisistä määrityksistä (ELISA-muodossa), joissa käytetään anti-ID:tä, on esitetty kuvassa 3.

Kuva 3. ELISA-pohjaisten PK-määritysten tyypit. ELISA-pohjaisen PK-määrityksen suorittamiseen on neljä yleistä tapaa. (1) Antigeenin talteenottomäärityksessä käytetään antigeenillä päällystettyä levyä, jonka on määrä sitoa vapaata vasta-ainelääkettä. Tämän jälkeen leimattu anti-ID pestään vasta-ainelääkkeen päälle, sidotaan ja visualisoidaan. Samanlaista visualisointiprotokollaa käytetään kolmessa muussa PK-määritystyypissä. (2) Anti-ID-siltamäärityksessä käytetään anti-ID:llä päällystettyä levyä, joka pestään vapaalla vasta-ainelääkkeellä ja sen jälkeen leimatulla anti-ID:llä. (3) Anti-ID-sieppaus-sandwich-testi sisältää anti-ID-päällystetyn levyn, joka pestään leimatulla anti-vakioalueen IgG:llä. (4) Anti-ID-antigeenin silloitusmäärityksessä anti-ID-päällystetty levy pestään leimattuun antigeeniin sitoutuneella vasta-ainelääkkeellä.

Immunogeenisuusmääritykset

Polyklonaalisia anti-ID:tä käytetään yleisesti immunogeenisuusmäärityksissä vertailukontrolleina. Immunogeenisuus on terapeuttisen lääkkeen, kuten vasta-ainelääkkeen, kyky indusoida humoraalinen ja/tai soluvälitteinen immuunivaste, joka johtaa lääkevasta-aineiden (ADA) kehittymiseen. ADA:t johtavat kaikkien vasta-ainelääkkeeseen liittyvien vaikutusten mitätöimiseen, mikä olennaisesti estää kokonaan lääkkeen terapeuttisen puolen.Siksi on erittäin tärkeää, että tutkijat analysoivat uuden vasta-ainelääkkeen immunogeenisuuden prekliinisen analyysin aikana. ADA on hyvin samankaltainen kuin anti-ID:t, koska molemmat sitoutuvat samaan vasta-ainelääkkeeseen, joten polyklonaalisten anti-ID:ien poolia voidaan käyttää positiivisena kontrollina analysoitaessa ADA:iden esiintymistä potilasnäytteissä. Kuvassa 4 on esimerkki ELISA-pohjaisesta immunogeenisuusmäärityksestä, jossa käytetään anti-ID:tä positiivisena kontrollina.

Kuva 4. Immunogeenisuusmääritysten tyypit. (A) Jos vasta-ainelääke indusoi ADA:iden kehittymistä, ADA:t voidaan visualisoida suoralla sitoutumis-ELISA:lla. Tässä määrityksessä vasta-ainelääkkeellä päällystetty levy pestään seerumilla. Sen jälkeen levy pestään leimatulla IgG:llä, joka sitoutuu vain ADA:iden vakioalueeseen. Näin ollen ELISA-testi fluoresoi vain, jos näyteseerumissa on ADA:ta. (B) Siltaavassa ELISA-määrityksessä vasta-ainelääkkeellä päällystetty levy altistetaan ADA:ta sisältävälle seerumille, joka sitoutuu yhteen vasta-ainelääkkeen ScFv-alueeseen. Jäljelle jäävä ADA ScFv-alue sitoutuu saman vasta-ainelääkkeen leimattuun versioon. Molemmat näistä määrityksistä on analysoitava positiivisen kontrollin, kuten anti-ID:n, avulla.

GenScripts Anti-Idiotype Antibody Generation Packages

GenScript tarjoaa nyt erillisiä anti-ID-tuotantopaketteja, jotka ovat spesifisiä valitsemallesi jatkokäyttösovellukselle, isäntälajille ja kloonisuudelle. GenScriptin anti-ID-tuotantopaketit sisältävät….

Rodent mAb: Immunisoi hiiret tai rotat vasta-ainelääkkeelläsi kehittääksesi vahvoja anti-ID-vasta-aineita, jotka on tuotettu jopa 3 kuukaudessa täydelliseen hintaan! Toimitettavat tuotteet sisältävät vakaat hybridoomasolulinjat, puhdistetun mAb:n ja täysin kattavan COA-raportin, jossa analysoidaan estotyyppi- ja spesifisyystestaus.

Kani mAb: GenScripts MonoRabTM -alustalla tuotetut anti-ID-vasta-aineet sitoutuvat markkinoiden korkeimmalla spesifisyydellä ja herkkyydellä. Talon sisäisen vanhempien kloonien supernatanttianalyysin jälkeen positiiviset kloonit käyvät läpi V-alueen sekvensoinnin, mikä mahdollistaa valitsemasi mAb:n optimaalisen rekombinantti-ekspression. Tämä paketti sisältää myös taatun toisen biotiinikonjugoidun anti-ID mAb-parin toimituksen, jotta sandwich-ELISA-pohjaisen PK-analyysin tuottaminen on helppoa.

Kani pAb: GenScriptin kani-pAb:t tarjoavat kätevän läpimenoajan ja hintaluokan asiakkaille, jotka ovat kiinnostuneita käyttämään polyklonaalisia anti-ID:itä immunogeenisuusanalyyseissä. Käyttämällä ekspressiivistä vasta-ainetuotantoprotokollaamme ja laajaa puhdistus- ja seulontaprosessia GenScriptin kani-anti-ID:n pAb:t ovat luotettava vaihtoehto seuraavaan projektiisi.

Klikkaa tästä, jos haluat tutustua valmiisiin anti-idiotyyppisiin vasta-ainetuotteisiin blockbuster-lääkkeitä vastaan.