Gesticht in de late jaren 1970 uit het perifere bloed van een jonge jongen met T-cel leukemie, Jurkat cellen zijn een geïmmortaliseerde T-lymfocyte cellijn. Zij zijn gebruikt om T-cel-leukemie, T-celsignalering en de gevoeligheid van kankercellen voor geneesmiddelenbehandelingen te bestuderen. Deze kleine, ronde cellen groeien gemakkelijk in suspensie en zijn ook gebruikt als modelsysteem voor verschillende cellevensvatbaarheids- en apoptosetests, zoals hier wordt aangetoond.
Bekijk StainFree Cell Detection Webinar
Download StainFree Cell Detection Application Note
无荧光染料的非标记细胞成像分析技术 >>
Download eBook: Cellen tellen als een pro
Figuur 1: StainFree celtellingen
Jurkat-cellen werden belicht met de SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer, en cellen werden geïdentificeerd met de vooraf gedefinieerde ‘CellsC’-instelling. Getoond aan de linkerkant zijn de originele doorvallend licht beelden en aan de rechterkant zijn dezelfde beelden met paarse maskers aan te geven cellen geïdentificeerd door de software. Twee celdichtheden worden getoond: 50.000 en 1562 cellen per well van een 96-well-plaat.
Figuur 2: StainFree celtellingen vs. fluorescente celtellingen
Jurkat-cellen die waren uitgezaaid bij dichtheden van 390 tot 50.000 cellen per well werden geteld met de StainFree-technologie (blauwe stippen), of ze werden gekleurd met EarlyTox™ Live Cell Assay kleurstof en groen fluorescerende cellen werden geteld (groene stippen). De met beide methoden verkregen celtellingen kwamen over het gehele bereik van celdichtheden goed overeen. De celtellingen werden gemeten voor vier onderzochte plaatsen per well.
Figuur 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Jurkat-cellen werden gedurende 24 uur behandeld met seriële verdunningen van staurosporine (rode plot), camptothecine (groene plot) en etoposide (blauwe plot) en vervolgens geanalyseerd met de EarlyTox Live/Dead Assay Kit van Molecular Devices. Levende cellen werden gekleurd met calceïne AM (groene kleurstof) en dode cellen werden gekleurd met ethidium homodimeer (rode kleurstof) en afgelezen op een SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader met de WellScan-functie, die meerdere lezingen uitvoert met regelmatige tussenruimten over de well. De resultaten werden uitgezet als de verhouding groen/rood versus de concentratie van de verbinding. Alle verbindingen die in dit experiment werden gebruikt, veroorzaakten een dramatische vermindering van de levensvatbaarheid van de cellen binnen 24 uur.
Figuur 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView™ 488 Assay
Jurkat-cellen werden gedurende 28 uur behandeld met staurosporine (rode plot), camptothecine (groene plot), of etoposide (blauwe plot) en vervolgens getest op apoptose met behulp van de EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit. Cellen tot expressie caspase-3/7 werden gekleurd groen fluorescerende en werden afgebeeld en geteld met behulp van de SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer.
Tip:
Dankzij hun afgeronde morfologie en uniforme grootte, Jurkat cellen zijn vrij gemakkelijk te imagen en te tellen. Voor StainFree celtelling, de vooraf gedefinieerde ‘CellsC’ in SoftMax Pro Software werkt geweldig.
Jurkat Cells Analysis Toolkit
- SpectraMax® i3x Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro Software
| Parameter | Instelling voor celtellingen |
| Optische configuratie | SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer |
| Leesmodus | Imaging |
| Leestype | Eindpunt |
| Golflengte-instellingen | Transmitted light |
| Image acquisition settings | Exposure: 7 ms |
| Instellingen voor beeldanalyse | Analysetype: Discrete Object Analyse Golflengte voor het vinden van objecten: TL |
| Objecten zoeken | Instellingen: ‘CellenC’ voorgedefinieerde instelling |
Over StainFree Cell Detection Technology
Imaging van cel-gebaseerde assays vereist meestal het gebruik van fluorescerende probes die toxisch kunnen zijn voor levende cellen of alleen kunnen functioneren in gefixeerde cellen. Een labelvrije methode voor het analyseren van celtellingen en celconfluentie stelt onderzoekers in staat om kwantitatief de celproliferatie en -gezondheid te controleren zonder tijdrovende workflows die de levensvatbaarheid van cellen kunnen verstoren.
Het SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate Platform met MiniMax 300 Imaging Cytometer maakt gebruik van unieke, gepatenteerde StainFree Cell Detection Technology waarmee u celproliferatie, cytotoxiciteit en andere assays kunt uitvoeren zonder nucleaire kleurstoffen zoals DAPI, dat intercaleert met DNA, of kleurstoffen voor levende cellen die op de lange termijn zelfs toxisch zijn voor cellen.